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兔髓核细胞原代培养及独活寄生汤对其细胞周期的影响
[目的]①研究兔髓核细胞（nucleus pulposus cells, NPCs）的培养条件及生物学特性。②探讨独活寄生汤（duhuo jisheng decoction, DHJSD）对体外培养兔NPCs周期的影响。[方法]①无菌条件下分离兔腰椎髓核组织，酶消化法联合组织块法消化，含15%胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）的DMEM/F12（1︰1）培养液培养，建立NPCs体外培养体系，细胞80%90%融合后进行传代培养。通过倒置相差显微镜观测细胞形态，通过II型胶原及集聚蛋白聚糖免疫组织化学进行细胞鉴定。②NPCs传第2代时进行实验。按照DHJSD药液不同浓度（100、200、400μg·mL-1）进行分组，0μg· mL-1为空白对照组。药物干预72h后，收集兔NPCs。MTT法检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期变化情况。[结果]兔NPCsⅡ型胶原和集聚蛋白聚糖免疫组织化学染色呈阳性，细胞质内有大量棕褐色颗粒状物质，核周尤为明显。与空白对照组比较，DHJSD干预后的兔NPCs OD值均增加（P<0.05）；兔NPCs G1期比例降低（P<0.05），S期比例增加（P<0.05）。[结论]体外单层培养，成功培养兔NPCs。DHJSD通过促进NPCs周期关键限制点G1/S期的切换，促进NPCs增殖，抑制NPCs凋亡，从而减轻或延缓椎间盘退变。
