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荧光定量PCR测定原发性干燥综合征患者血浆循环DNA及其临床意义
目的：荧光定量PCR测定原发性干燥综合征（pSS）患者血浆循环游离DNA（cfDNA），分析其在疾病中的意义。方法选用人类基因组管家基因TaqMan? GeneExpression Assays：ABI 4331182，ID：Hs02758991-g1，采用PCR水解探针模式（Taqman探针）测定pSS及正常对照组中血浆cfDNA的值，同时测定pSS患者血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM），并评定pSS的活动指数（SSDAI）和损害指数（SSDDI），分析cfDNA与疾病活动之间的关系。结果pSS组cf DNA浓度值为（380.64±259.10）μg/L，正常对照组cfDNA浓度值为（32.02±16.39）μg/L，两者比较差异有统计学意义（P<0.05）；pSS组中：cfDNA浓度与SSDAI呈正相关（r=0.533， P<0.01），与SSDDI无相关性（r=0.051，P>0.05），SSDAI与SSDDI呈正相关（r=0.412，P<0.01），pSS组以SSDAI值中位数4分为2组，31例pSS （SSDAI≥4）的cfDNA浓度值（509.70±215.57）μg/L，35例pSS（SSDAI<4）的cfDNA浓度值（262.65±186.35）μg/L，两组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论血浆cfDNA在pSS患者中升高，与干燥综合征疾病活动性相关，血浆cfDNA可作为PSS疾病活动的观察指标。
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应用微滴式数字PCR定量检测结直肠癌患者血浆循环游离DNA
目的 建立基于微滴式数字PCR(ddPCR)技术定量检测结直肠癌(CRC)患者血浆循环游离DNA(cfDNA)含量的方法,并初步探讨其临床应用.方法 设计β-actin基因ddPCR特异性引物和探针,通过条件优化建立cfDNA定量检测方法;用不同浓度标准品验证所建方法的特异性、灵敏度、线性及重复性;并用该法检测39例CRC患者与40例健康人群血浆标本,比较CRC患者与对照组、术前与术后组血浆cfDNA浓度差异.结果 所建方法无非特异性扩增,检测灵敏度为0.29 copies/μl,在模板浓度为10 pg/μl～ 10 ng/μl内线性良好(y=-2.34 +33.17x,r2=0.999),批内CV为9.85％,批间CV为11.04％;CRC患者血浆cfDNA结果(7.20 ±5.15) copies/μl明显高于对照组(3.38±1.97)copies/μl(P＜0.01);术后组血浆cfDNA浓度为(3.90±3.39) copies/μl,较术前组明显下降(P＜0.01).结论 建立的ddPCR定量检测血浆cfDNA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可为CRC患者的临床决策和病程监控提供一种无创手段.
