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高速PCR文献资料
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高速RT-PCR法检测手足口病肠道病毒效果评价
目的 建立高速反转录PCR(RT-PCR)法,并探讨其在手足口病肠道病毒检测中的应用前景.方法 采用SpeedStar HS DNA polymerase和HiScript II Reverse Transcriptase建立高速RT-PCR法,采用高速RT-PCR法和常规试剂盒法对不同浓度肠道病毒阳性基因标准品和112份手足口病核酸阳性样本进行检测,比较两种方法检测结果差异.结果 高速RT-PCR法和常规试剂盒法整个PCR扩增时间分别为54和96 min.高速RT-PCR法的低检出限为105拷贝/μL,常规试剂盒法的低检出限为为106拷贝/μL;高速RT-PCR法的扩增效率为106.67％,高于常规试剂盒法的102.12％;两种方法的检测结果具有高度一致性(Kappa=0.755,P<0.05).高速RT-PCR法的批内变异系数为0.88％～1.37％,批间变异系数为1.04％～2.95％.结论 所建立的高速RT-PCR法具有良好的检测效率、 灵敏度、 重复性和稳定性,适用于手足口病肠道病毒核酸快速检测.
