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体外培养大鼠骨髓间充质干细胞成骨基因表达谱的检测
目的:探讨体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)成骨相关基因的表达谱,明确体外培养大鼠骨髓MSC的成骨潜能. 方法: 体外培养SD大鼠骨髓MSC,取第3代细胞提取总核糖核酸(RNA),制备杂交探针,并运用SuperArray公司提供的大鼠Oligo GEArray骨再生基因芯片(每张芯片可测113种基因)进行杂交,化学发光检测,通过X线胶片或台式扫描获得化学发光的芯片图像,使用网上提供的综合型GEArry表达分析配套软件(GEArry Expression Analysis Suite)进行完整的芯片数据分析. 结果:检测体外培养大鼠骨髓MSC的113种成骨相关的基因,其中有31种基因表达强度较低,45种基因呈中等强度表达,37种基因表达强度较高. 结论:体外培养大鼠骨髓MSC具有部分成骨细胞基因表型特征,但成熟成骨细胞的特征基因表达量较低,提示大鼠MSC是具有较强成骨细胞分化潜能的成纤维样细胞.
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电磁场对骨髓间充质干细胞骨再生基因表达的影响
目的 用骨再生基因芯片技术筛选经电磁场刺激后骨髓间充质干细胞(MSCs)差异表达的骨再生相关基因,并初步探讨电磁场定向分化骨髓MSCs的机制.方法 体外培养Sprague-Dawley大鼠的骨髓MSCs,取第3代细胞给予电磁场刺激.提取暴磁组和未暴磁的对照组细胞总RNA,反转录制备杂交探针,并用大鼠骨再生基因芯片(每张芯片可测113种基因)进行杂交、化学发光检测、X胶片曝光、扫描,获得化学发光的芯片图像,采用综合型GEArry表达分析配套软件进行完整的芯片数据分析.选取有代表性的基因进行半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测.结果 与对照组细胞相比,在暴磁组细胞中表达差异显著的基因有19个,其中6个基因表达上调,13个基因表达下调.选取其中的3种基因(BMP1、VDR和EGF)进行RT-PCR检测,结果 显示与对照组相比,暴磁组的BMP1 mRNA、VDR mRNA表达水平上调;EGF mRNA表达水平下调,与芯片结果 一致.结论 在15 Hz、1 mT的正弦波电磁场作用下,骨髓MSCs的骨再生基因表达发生了明显变化,这些基因主要与骨髓MSCs向成骨细胞分化密切相关,对进一步研究电磁场对骨髓MSCs的促分化机制具有指导意义.
