您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
表面活性物质相关蛋白A1文献资料
-
SP-A1在甲醇酵母中的分泌表达及产物的鉴定
目的:研究人肺表面活性物质相关蛋白A1(SP-A1)在甲醇酵母Pichia pastoris(P.pastoris)中的分泌表达、产物的分离纯化及免疫活性测定. 方法:将人SP-A1基因克隆至P.pastoris的分泌表达质粒pPIC9K上,获得重组表达质粒pPIC9K/SP-A,转化P.pastoris GS115、KM71.通过G418筛选获得高拷贝转化子(HIS4Mut+),在摇瓶中培养、甲醇诱导表达SP-A1,纯化目的蛋白,并免疫小鼠,ELISA 法和 western blotting分析SP-A1的免疫活性. 结果:SDS-PAGE结果显示,在P.pastoris 中经甲醇诱导,SP-A1获得表达,其表达量在上清中为200 mg/L.经过纯化可获得纯度达95%以上的蛋白质.ELISA法和western blotting结果表明,目的蛋白可被多克隆抗体识别,可刺激小鼠产生抗体. 结论:人组织特异性蛋白SP-A1可在P.pastoris中表达,表达产物具有免疫原性.
关键词： 表面活性物质相关蛋白A1 甲醇酵母 表达 纯化
