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承载分子文献资料
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承载分子PaP3.30在小分子活性肽融合表达中的应用
目的:筛选并克隆一个承载分子,研究其在肽抗生素及其他小分子活性肽融合表达中的应用.方法:根据肽抗生素为小分子活性肽,通常带正电荷的特性,从绿脓杆菌噬菌体(PaP3)基因组中筛选一承载分子,构建其与肽抗生素hPAB-β的融合蛋白表达载体,确认该承载分子能在大肠杆菌中融合表达肽抗生素后,再选择一组不同来源、不同大小、不同等电点的小肽分子作为研究对象,分别构建它们与承载分子的融合蛋白表达载体,转化大肠杆菌进行表达.根据表达情况,分析所选择的承载分子融合表达生物活性小肽的能力.结果:从PaP3基因组中成功地筛选到ORF-30编码的162个氨基酸组成的蛋白作为承载分子(PaP3.30);构建该承载分子与肽抗生素hPAB-β的融合蛋白表达质粒pQE-PaP30-hPAB-β,在大肠杆菌中表达的融合蛋白占细菌总蛋白的30%以上;对所选择的不同来源(人、蜜蜂、爪蟾、大肠杆菌)、不同大小(相对分子质量为700～5 300)、不同等电点(pI 2.9～12)的六种小肽分子PaP3.30,均能实现其在大肠杆菌中高效融合表达,表达量为细菌总蛋白的35%～44%.结论:所筛选的承载分子PaP3.30具有很强的融合表达小分子活性肽的能力,为建立高效表达和制备活性小肽的技术平台创造了条件.
