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传染性非典型肺炎冠状病毒文献资料
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SARS病毒S蛋白编码基因在大肠杆菌中的克隆与表达
目的克隆传染性非典型肺炎(SARS)病毒纤突蛋白S氨基端编码序列,并将其置于大肠杆菌作融合表达,为快速检测SARS病人IgM提供抗原.方法从GenBank获得SARS病毒BJ01株纤突蛋白S基因序列,人工合成其氨基端501bp双链DNA序列,在5和3端分别引入BamH Ⅰ、Xho Ⅰ酶切位点.常规法将其克隆到pBluescript Ⅱ SK(+)质粒中进行核酸序列测定,进一步将其克隆进原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含S蛋白基因的重组原核表达质粒.重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.结果核酸序列测定与分析的结果表明,克隆的501bp基因序列与基因数据库中所登记的BJ01毒株序列呈现100%同源性.IPTG诱导后的菌体,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),显示有一个大小为42ku的融合表达蛋白产生.结论 S蛋白氨基端501bp编码基因在E.coli中获得正确表达,为进一步研究提供了实验室资料.
关键词： 传染性非典型肺炎冠状病毒 纤突蛋白S 原核表达
