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人胰岛素样生长因子1前体文献资料
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人胰岛素样生长因子1前体基因的重组、表达及纯化
目的构建含有人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)前体编码基因的重组载体,在E.coliBL21中表达,并探讨其抗原性和应用价值.方法用PCR法,从现有重组质粒pBakPAK 8/hIGF-1中,扩增编码hIGF-1前体的基因片段,经双酶切、纯化、连接后得到pET29a(+)/hIGF-1重组体,再将其转化大肠杆菌BL21-CodonPlus并诱导表达.表达产物经镍柱亲和层析纯化后,用Western blot法检测重组蛋白的抗原活性.结果重组持粒pET29a(+)/hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析证实构建成功.在大肠杆菌BL21-CodonPlus中经IPTG诱导表达,有一相对分子质量15 000的重组蛋白hIGF-1前体,该蛋白经镍柱亲和层析获得了良好的纯化效果,具有特异的抗原活性.结论成功地克隆并表达相对分子质量为15 000的hIGF-1前体编码基因,为进一步制备抗hIGF-1抗体和后续hIGF-1生物学功能研究打下了良好基础.
关键词： 人胰岛素样生长因子1前体 基因 抗原性
