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膀胱移行细胞癌抗凋亡因子生存素拼接变异体的表达
目的 探讨生存素(survivin)拼接体在膀胱移行细胞癌的表达情况及其与肿瘤分期、分级的关系.方法 30例膀胱移行细胞癌患者中,Ta/T1期17例,T2～T4期13例;G1/G2级23例, G3级7例;配对的癌旁组织8例;另有8例正常膀胱黏膜取自非肿瘤患者.采用TRIzol一步法提取总RNA,逆转录合成cDNA,再进行PCR扩增.所有标本用GAPDH mRNA作内对照,目的 PCR条带用BIO-RAD Quantity One 4.5软件根据面积与吸光度定量分析.结果 30例膀胱移行细胞癌标本有28例检测到生存素及其拼接变异体(生存素-△Ex3和生存素-2B)mRNA的表达,阳性率为93.3%.生存素为主要的转录本(0.712±0.120),生存素-△Ex3(0.101±0.029)和生存素-2B(0.214±0.076) mRNA为低水平表达,三者的表达水平有显著性差异(P＜0.01).与正常膀胱黏膜和癌旁组织相比,膀胱癌组织生存素及其拼接变异体mRNA的表达水平均明显增高(P＜0.01).而生存素-2B mRNA表达水平在浸润性、高级别癌明显低于非浸润性、低级别癌(P＜0.01).结论 生存素拼接变异体可表达于膀胱癌组织,且生存素-2B在浸润性、高级别膀胱癌中表达降低,推测其抗凋亡活性较生存素和生存素-△Ex3为低.
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大鼠睾丸GABAA受体β3t拼接变异体在CHO细胞中的异源表达
目的:研究大鼠睾丸GABAA受体β3t拼接变异体特有5'端的特性以及可能的细胞内定位作用.方法:将β3t拼接变异体的全长Cdna克隆到真核表达载体Pegfp-N1和Pegfp-C1中,用磷酸钙共沉淀方法转染CHO细胞,表达后用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察分析,并用ConATexa s-Red标记转染后的细胞,进一步研究其在胞内的定位分布情况.结果:大鼠睾丸GABAA受体β3t拼接变异体在CHO细胞中表达时呈现两种表达类型,但均不能定位到细胞膜上,而大鼠脑β3亚基能定位分布到细胞膜上.ConA标记的结果显示β3t拼接变异体滞留在内质网上.结论:大鼠睾丸GABAA受体β3t拼接变异体N端的25aa序列中可能存在内质网滞留信号.
