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含对硝基苯丙氨酸HER2疫苗的免疫原性研究
为了打破HER2自身蛋白的免疫耐受,产生高效的免疫应答,利用遗传密码扩充技术,将免疫原性氨基酸对硝基苯丙氨酸定点引入到HER2片段的第5、26、79位,获得了含有对硝基苯丙氨酸的HER2突变体.通过镍亲和色谱柱,获得纯度达95%以上的原型和突变体 HER2 分子.对 HER2 疫苗的免疫原性进行分析,结果显示,pNO2Phe79HER2 能够在C57BL/6小鼠体内产生高滴度的交叉性抗体.免疫小鼠的抗血清能够识别具有完整HER2受体胞外区的SKBR-3 细胞,并通过ADCC效应裂解HER2高表达的HER2+B16F10细胞.这些研究结果提示,定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO2Phe79 HER2可以作为靶向HER2的肿瘤疫苗候选分子.
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含对硝基苯丙氨酸的B淋巴细胞刺激因子疫苗对狼疮肾炎模型小鼠的保护作用
考察含对硝基苯丙氨酸的B淋巴细胞刺激因子(BAFF)治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的效果.利用本研究前期构建的工程菌,表达纯化了B淋巴细胞刺激因子的可溶型突变体(smBAFF)以及在其65位定点引入了对硝基苯丙氨酸的改构体(pNO2 Phe65 smBAFF).通过考察pNO2Phe65smBAFF体外促小鼠淋巴细胞增殖活性、免疫原性以及所诱导的抗血清对天然BAFF活性的抑制作用,评价了其用于治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的可行性;同时采用了cGVHD(graft-versus-host disease)诱导的狼疮肾炎小鼠模型评价了pNO2Phe65 smBAFF的药理活性.结果表明:定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO2 Phe65 smBAFF不具有促进小鼠淋巴细胞增殖的能力;由于对硝基苯丙氨酸的引入显著增强了蛋白的免疫原性,诱导机体产生了可以抑制天然BAFF活性的交叉抗体;在cGVHD诱导的狼疮肾炎小鼠模型中,pNO2Phe65smBAFF可显著减轻疾病症状.定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO2Phe65 smBAFF可以作为治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的候选分子.
