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胞内体分选文献资料
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TfR-Ubi融合蛋白稳定表达株的构建及功能初测
目的:通过构建转铁蛋白受体-泛素(transferrin receptor-ubiquitin,TfR-Ubi)融合蛋白,研究胞内体蛋白分选机制.方法:首先扩增小鼠泛素和人源转铁蛋白受体基因,构建HA-TfR-Ubi表达质粒,转染A431细胞后,采用Western blot验证融合蛋白的表达.在稳定表达TfR-Ubi的A431和Hrs-KO MEF细胞株中,转铁蛋白刺激,免疫荧光法观察TfR-Ubi融合蛋白在细胞内的位置.结果:成功构建HA-TfR-Ubi表达质粒,免疫荧光结果提示TfR-Ubi融合蛋白被分选到晚期内体(late endosome)/溶酶体,Hrs-KO MEF细胞中TfR-Ubi融合蛋白分选受到影响.结论:TfR-Ubi融合蛋白在胞内体被分选,证明了泛素修饰改变了转铁蛋白受体的降解方式,为胞内体分选转运装置(endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)分选机制研究提供了实验工具.
