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SYBR Green Supermix文献资料
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小鼠CCL20mRNA 实时荧光定量PCR检测方法的建立
目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法.方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA.采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平.评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平.结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green 实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带.检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P＜0.05).结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础.
