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抗8-氮鸟嘌呤腺苷产生菌的选育
目的选育抗8-氮鸟嘌呤腺苷产生菌.方法以一株黄嘌呤缺陷型、脱氨酶阳性枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)为出发菌株,经过60Co、5-氟尿嘧啶和硫酸二乙酯连续诱变,获得产量较高菌株.结果突变株具有鸟嘌呤营养缺陷型,丧失了腺嘌呤脱氨酶活性、具有抗8-氮鸟嘌呤特性,摇瓶培养产苷达到3.2g/L,较出发菌株提高了2.76倍.结论筛选抗8-氮鸟嘌呤是选育腺苷产生菌的一个有效方法.
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次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型杂交瘤细胞的快速筛选方法
目的建立一种快速而简便的次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶(HAT)敏感型杂交瘤细胞株的筛选方法,以缩短二次杂交瘤细胞制备时间.方法在培养瓶中培养杂交瘤细胞,每2～3天倍比提高培养液中8-氮鸟嘌呤(8-N)浓度,从1.25 μg/ml直至20 μg/ml,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较筛选前后抗体吸光度(A)值.结果成功地诱导筛选后,获得HAT敏感的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型杂交瘤细胞2株,均保留分泌单抗功能,其单抗A值与8-N筛选培养前无明显差异.结论改进后的筛选方法较常规方法所需时间缩短1.0～2.5倍.
关键词： 杂交瘤 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 8-氮鸟嘌呤 -
次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选
目的 筛选次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶(HAT)敏感型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞株,为双特异性抗体的制备作好准备.方法 在培养瓶中培养产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞株H6,取长到对数生长期的细胞,加入1.25 μg/ml的8-氮鸟嘌呤,继续培养,当细胞长到60％左右时,弃去一部分细胞,加入2.5 μg/ml的8-氮鸟嘌呤,继续培养,重复以上操作,倍比提高8-氮鸟嘌呤的含量,直至8-氮鸟嘌呤浓度达到20μg/ml,取细胞上清ELISA检测其产抗体情况.结果 成功诱导筛选到HAT敏感的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型杂交瘤细胞6株,均能分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体.结论 该方法能成功筛选HAT敏感型抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞.
关键词： 8-氮鸟嘌呤 次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶(HAT) 杂交瘤
