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模拟微重力影响人牙髓干细胞的矿化能力与RhoA-Rho激酶信号通路相关性研究
目的：初步研究RhoA-Rho激酶信号通路在模拟微重力( Simulated Microgravity,SMG)影响人牙髓干细胞( human dental pulp stem cells,hDPSCs)矿化过程中的作用。方法将经酶消化法分离、纯化后的人牙髓干细胞体外扩增培养,以1×106细胞接种于PLGA支架上,分别于模拟微重力下及普通重力下矿化诱导液中培养,72 h后收集细胞,采用Western Blot检测RhoA蛋白表达；此外,在重力条件下采用Rho激酶抑制剂Y-27632,以矿化诱导液培养组作为对照组,检测矿化诱导3、5、7、10 d两组碱性磷酸酶( Alkaline phosphatase,AKP)活性变化,采用Western Blot检测矿化诱导10 d,成牙本质相关蛋白牙本质基质蛋白(dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)的表达,采用茜素红染色法检测矿化诱导21 d,矿化结节形成水平。结果模拟微重力下,人牙髓干细胞中RhoA蛋白的表达下调；在普通重力矿化诱导条件下,加入抑制剂Y-27632后,各时间点细胞AKP表达水平均较对照组有所降低；矿化诱导10 d,成牙本质相关蛋白DSP、DSPP、DMP-1表达明显下调,矿化诱导21 d,矿化结节形成同样有所减少。结论模拟微重力下,RhoA蛋白表达水平下调；抑制Rho激酶的表达,可降低hDPSCs矿化能力,提示RhoA-Rho激酶信号通路可能参与模拟微重力对hDPSCs矿化能力的影响。
关键词： 人牙髓干细胞 模拟微重力 RhoA-Rho激酶信号通路 矿化
