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天然P30文献资料
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抗弓形虫单克隆抗体的制备鉴定及应用
目的 制备抗弓形虫全抗原、天然P30、重组P30的单克隆抗体(McAb),为抗原提纯、弓形虫病诊断及亚单位疫苗的研制奠定基础.方法 用弓形虫全抗原、天然P30、重组P30分别免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选稳定分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株.用ELISA法测定McAb亚类和效价;通过SDS-PAGE和Western blot进行特异性鉴定;Giemsa染色观察杂交瘤细胞的染色体数目;利用电镜及IFAT观察McAb对弓形虫的杀伤作用及其作用位点.结果 筛选出3株(4B10、2B3、1H6)特异性较好的杂交瘤细胞株.Western blot结果显示,2B3、1H6产生的McAb与弓形虫全抗原的阳性反应带均在30 kDa处,4B10反应带主要在22 kDa处;2B3,1H6,4B10 McAb的效价(ELISA)分别为:1:102 400、1:51 200、1:12 800;2B3、1H6为IgM,4B10为IgG2b;3株细胞的染色体数均在100条以上.电镜观察到McAb作用后的弓形虫虫体聚集、肿胀,表面出现缺口和空洞,虫体变形破碎、膜变厚.抗弓形虫全抗原及天然P30的McAb能准确识别重组体pET-30a-ROP2、pET-30a-P30的表达蛋白.结论 抗弓形虫全抗原、P30抗原的McAb均对弓形虫具有明显的杀伤作用,能准确识别P30抗原,可应用于弓形虫病诊断、抗原鉴定及亚单位疫苗的研制.
