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应激引起血压升高大鼠血管升压素V1受体mRNA水平改变
实验在雄性Sprague-Dawley大鼠上进行. 实验动物被随机分为对照组和应激组, 应激组大鼠每天给予电击足底结合噪声的应激刺激, 每日2次, 每次2 h. 应激组大鼠在接受连续15 d的慢性应激刺激后, 其尾动脉收缩压与对照动物相比有显著升高. 对照组为16.25±0.63 kPa (n=7); 应激组为19.55±1.45 kPa (n=8, P<0.05). 用RT-PCR结合Southern印迹核酸分子杂交技术观察到, 血管升压素(vasopressin, AVP)V1受体mRNA广泛存在于大鼠下丘脑、皮质、延髓等部位以及心脏、肝脏、肾脏等组织中. 用定量PCR方法观察到, 大鼠在接受慢性应激刺激之后, 其大脑顶叶皮质、下丘脑及延髓组织中AVP V1受体mRNA水平均显著低于正常大鼠(顶叶皮质: P<0.05; 下丘脑: P<0.01; 延髓: P<0.001), 而心脏、肝脏及肾脏组织中的AVP V1受体mRNA水平与正常大鼠相比均无明显差别(心脏: P>0.05; 肝脏: P>0.05; 肾脏: P>0.05). 上述结果提示, 慢性应激刺激可引起大鼠不同部位脑组织AVP V1受体合成水平下调, 可能导致上述部位组织中AVP V1受体密度降低, 而对心脏、肝脏及肾脏组织中的AVP V1受体密度则无显著影响.
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采用单碱基突变模板作为内对照对组织中mRNA水平进行PCR定量
用PCR方法对原始模板进行单碱基突变,在原始模板DNA的特定位点引入一个EcoR Ⅰ酶切位点.单碱基突变的DNA经PCR扩增后定量、稀释,作为内标加入到样品中与待测DNA同时进行PCR扩增,扩增产物经酶切后电泳,根据电泳结果中不同分子量DNA片段的含量,对样品中待测基因拷贝数进行定量分析.实验结果观察到:每1μg肝脏组织总RNA经逆转录后AVPV1受体cDNA拷贝数约1.25×10-20mol.
