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金黄仓鼠Apoa5基因表达载体的构建及在不同组织器官中的差异表达
目的 构建金黄仓鼠载脂蛋白A5(Apoa5)基因表达载体以及在不同组织中的表达差异分析,为深入研究Apoa5基因在金黄仓鼠不同组织中功能奠定基础.方法 提取金黄仓鼠肝脏组织总RNA,采用RT-PCR方法对金黄仓鼠Apoa5基因的cDNA进行克隆,构建Apoa5基因表达载体并将其转染293T细胞,分别采用RT-PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白质表达水平.采用荧光定量PCR检测并分析Apoa5 mRNA在8个组织中的表达量.结果 经PCR检测鉴定,Apoa5基因表达载体构建成功,经测序分析金黄仓鼠Apoa5基因cDNA全长1 243 bp,编码366个氨基酸,与人、大鼠、小鼠等物种比对,核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性,金黄仓鼠与人、大鼠、小鼠的氨基酸同源性分别为75％、84％、84％.转染293T细胞48 h后,RT-PCR和Western blot结果表明,Apoa5基因在mRNA和蛋白质水平都有表达.荧光定量PCR结果显示,Apoa5 mRNA在肝脏表达量高,在脑和睾丸中中度表达,在心、脾脏、肺、肾、卵巢组织中低度表达.结论 成功构建Apoa5基因表达载体并分析其在不同组织中的表达差异,为制备Apoa5转基因金黄仓鼠动物模型以及研究Apoa5基因在金黄仓鼠脂类代谢中的功能奠定基础.
关键词： 金黄仓鼠 载脂蛋白A5(Apoa5) 基因表达 -
载脂蛋白A5(ApoA5)经CIDEC负向调控人脂肪间充质干细胞(AMSC)脂分化
目的 探究载脂蛋白A5 (apolipoprotein A5,ApoA5)对人脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cell,AMSC)成脂分化的影响及其机制.方法 获取中南大学湘雅二医院腹部外科手术患者皮下脂肪组织,分离人AMSC,经成脂诱导剂诱导分化,以600、1 200 ng/mL ApoA5干预细胞,作为实验组;不加ApoA5干预的细胞作为对照组.定期收获细胞,观察ApoA5对细胞内脂滴油红O吸光度、三酰甘油(triglyceride,TG)含量和成脂标志物mRNA水平的影响.收获干预至14天的细胞,通过荧光抗体标记,利用激光共聚焦实验观察ApoA5与细胞死亡的DFF45样效应因子C(cell death-inducing DNA fragmentation factor 45-like effector C,CIDEC)是否存在共定位现象.定期收获细胞,分别应用real-time PCR和Western blot观察ApoA5对CIDEC、C/EBPβ的mRNA和蛋白质水平的影响.结果 在同一促分化时间段内,ApoA5干预的细胞油红O吸光度、TG含量及aP2、FAS等成脂分化标志物mRNA表达水平下降.经过激光共聚焦分析发现,在AMSC成脂分化过程中,ApoA5与CIDEC存在共定位现象.在同一促分化时间段内,ApoA5可明显下调细胞内CIDEC、C/EBPβ的mRNA和蛋白质水平.结论 在成脂分化过程中ApoA5与CIDEC共存,ApoA5通过下调CIDEC可抑制AMSCs成脂分化.
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载脂蛋白A5与2型糖尿病并发冠心病相关性分析
目的:探讨APOA5在与血脂代谢及其糖尿病并发冠心病中的作用.对象:研究对象共90例,分为三组.2型糖尿病并发冠心病组30例,糖尿病组30例,对照组30例,为内分泌科门诊及健康体检者.方法:(1)标本的采取:所有研究对象均在清晨空腹自肘静脉采血5ml,留取血清.APOA5含量测定应用ELISA法.(2)结果以均数±标准差(x±s)表示,APOA5与各指标之间的关系用双变量相关分析.结果:(1)与对照组比较,2型糖尿病并发冠心痛和糖尿病组的APOA5水平明显降低,前者更明显(P＜0.05);CH、TG和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均明显升高,前者更明显(P ＜0.01或P＜0.05)结论:2型糖尿病并发冠心痛患者和糖尿病患者的APOA5水平明显低于健康对照者,血清CH、TG和LDL-C明显高于健康对照者,APOA5水平降低可能是冠心病和糖尿病的危险因素.
