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中间缺失突变体文献资料
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用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体
目的:以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCⅡ类分子反式激活因子(MHC classⅡmolecule transactiva-tor,CⅡTA)突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法.方法:首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段,再将两片段混合,在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸,然后再加入引物进行目的片段指数扩增,将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES.结果:成功地构建出缺失第109～226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体.结论:优化后的重叠延伸PCR法(OE-PCR)克服了传统方法的诸多弊端,非常适合于构建中间缺失突变体,值得推广.
关键词： 重叠延伸PCR法 中间缺失突变体 MHCⅡ类分子反式激活因子 -
用改进的重叠区扩增基因拼接法构建中间缺失突变体
目的构建缺失第325～373位氨基酸密码子的磷脂酸磷酸化激酶β(phosphatidylinositol 4-kinase beta,PI4K-β)基因,以探索一种简便的构建中间缺失突变体的方法. 方法应用重叠区扩增基因拼接法的原理,在拼接延伸后,再进行一次PCR扩增,得到缺失第325～373位氨基酸密码子的PI4K-β基因,克隆至pCMV-Tag4A真核表达载体. 结果成功地构建出缺失第325～373位氨基酸密码子的PI4K-β突变体. 结论这种改进的重叠区扩增基因拼接法可以有效而可靠地构建中间缺失突变体, 具有推广价值.
关键词： 重叠区扩增基因拼接法 中间缺失突变体 克隆
