首页 > 文献资料
-
大鼠肝脏再生增强因子cDNA的克隆及其序列分析
目的:克隆大鼠肝脏再生增强因子(ALR)cDNA,并对其序列进行分析.方法:建立大鼠2/3肝切除模型,从再生肝组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出大鼠ALRcDNA,亚克隆于pGEM-T载体,并将DNA序列及其推测的氨基酸序列与Genebank作同源性比较.结果和结论:克隆到大鼠ALRcDNA,经核苷酸序列测定证实序列完全正确,其核苷酸序列没有任何突变,它与酵母ERV1cDNA有较高的同源性,核苷酸序列同源性达54.99%,氨基酸序列同源性达47.01%,并发现氨基酸序列中含有锌指蛋白结合区域.
-
人肝脏再生增强因子cDNA的克隆、表达及产物活性鉴定
目的通过对人源肝脏再生增强因子(Augmenter of liver regeneration,ALR)cDNA进行克隆、表达及表达产物活性的初步鉴定,为基因工程大量制备重组hALR (human Augmenter of liver regeneration,ALR)及其临床应用提供资料.方法提取人胎肝总RNA,通过RT-PCR获得全长hALRcDNA,构建原核融合表达质粒pGEX-4T-3/hALR cDNA,转化大肠杆菌诱导表达融合蛋白.MTT法及小鼠CCl4肝衰竭模型检测重组hALR的生物学活性.结果测序证实克隆得到的hALR序列完全正确.SDS-PAGE检测表达产物分子量约41kD,与融合蛋白GST-hALR的预期分子量相吻合.MTT比色结果为21.9ng/ml hALR对Hep3B细胞系的促增殖作用显著高于对照组(P＜0.05).体内活性检测结果表明hALR能显著提高CCl4诱导肝功能衰竭动物的存活率(X2=3.923,P＜0.05).结论重组hALR的制备过程简单易行,可通过基因工程方法大量生产.活性检测表明hALR具有促肝细胞增殖和肝功能修复的作用.
