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miR-99a-mTOR在低氧调控人脐静脉内皮细胞增殖中的作用研究
目的 探讨低氧对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelia cell,HUVEC)增殖的影响及调控机制.方法 HUVEC在不同氧浓度(1%、5%、21%O2),37℃5% CO2培养24 h,WST-1法检测增殖.生物信息学预测miR-99a靶基因并利用双荧光素酶报告基因检测方法验证.Lipofectamine 2000将miR-99a mimics、miR-99a siRNA、哺乳类动物雷帕霉素受体(mammalian target ofrapamycin,mTOR) siRNA、mTOR cDNA转染HUVEC,低氧下继续培养.qRT-PCR检测miR-99a表达,RT-PCR及Western blot检测mTOR表达.结果 与常氧(21% O2)相比,低氧(1%O2)显著抑制HUVEC增殖(33.3%±6.5%,P=0.004).低氧上调miR-99a表达[(1.94±0.24)倍,P=0.001],进而抑制HUVEC增殖.生物信息学及荧光素酶报告基因系统检测显示mTOR为miR-99a靶基因,低氧时miTR-99a抑制mTOR基因及蛋白水平表达.进一步研究显示低氧通过miR-99a-mTOR途径抑制内皮细胞增殖.结论 低氧处理明显抑制HUVEC增殖,其机制可能与miR-99a-mTOR途径有关.
关键词: 低氧 miR-99a 哺乳类动物雷帕霉素受体 增殖