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基于癌睾抗原CTNNA2长肽疫苗免疫活性检测
目的:设计针对癌睾抗原CTNNA2的包含多个表位的长肽,并鉴定这些长肽的免疫活性.方法:通过NETCTL 1.2、SYFPEIT HI和BIMAS软件预测打分选取CTNNA2的HLA-A2限制性的表位;对包含多个优势CTL表位区域选取合适长度的长肽,通过体外活性实验验证长肽是否具有免疫活性.酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测DC荷长肽诱导的外周血单个核细胞(PBMCs)中 γ-干扰素(IFN-γ)的释放;细胞因子染色检测表位肽诱导CTL的能力;LDH法和CFSE法检测CTL对靶细胞的杀伤活性.结果:ELISPOT和细胞因子染色实验结果显示长肽P778-800、P857-880诱导的CTL具有分泌IFN-γ 的能力.CFSE和LDH细胞毒实验结果显示表位P778-800、P857-880对靶细胞有一定的杀伤作用.结论:成功筛选鉴定出针对癌睾抗原CTNNA2的2条长肽,可能对基于CTNNA2的癌症免疫疗法的未来临床试验具有意义.
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针对癌睾抗原PLAC1、PL2L60、MAGE-3的长肽疫苗设计及其免疫活性检测
目的:设计针对癌睾抗原PLAC1、PL2L60、MAGE-3的长肽,并检测其免疫活性.方法:利用在线数据库预测PLAC1、PL2L60、MAGE-3的CTL表位,在表位集中区域选取适当长度的长肽,化学合成并纯化后,通过体外和体内活性实验验证长肽是否具有免疫活性.结果:针对PLAC1、PL2L60、MAGE-3预测出HLA-A2限制性CTL表位并设计出7条长肽.体外自提呈、DC荷肽的ELISPOT结果和体外LDH结果显示,PLAC1 P42-64、PL2L60 P169-191、MAGE-3 P101-122、MAGE3-P152-175等4条长肽具有较好的免疫活性;体内ELISA结果显示MAGE-3 P152-175在HLA-A2.1/Kb转基因小鼠中诱导了较多的IFN-γ释放,体内LDH结果显示PLAC1 P42-64、PL2L60 P169-191、MAGE-3 P101-122、MAGE-3 P152-175等4条长肽所诱导的HLA-A2.1/Kb转基因小鼠脾淋巴细胞对靶细胞具有较高的杀伤率.结论:成功筛选鉴定出针对癌睾抗原PLAC1、PL2L60、MAGE-3的4条长肽,可用作免疫治疗疫苗.
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肺癌抗原COX-2长肽疫苗的设计及免疫活性检测
目的:设计针对肺癌抗原环加氧酶2(COX-2)的长肽,并鉴定这些长肽的免疫活性.方法:通过NetCTL 1.2、SYFPEITHI和IEDB软件预测打分来选取COX-2的HLA-A2限制性表位;对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位集中区域选取合适长度的长肽,通过体外活性实验验证长肽是否具有免疫活性.树突状细胞(DC)荷肽实验和ELISPOT检测荷长肽DC诱导的外周血单个核细胞(PBMCs)中干扰素γ(IFN-γ)的释放;胞内因子染色检测表位肽诱导CTL的能力;乳酸脱氢酶(LDH)实验和CFSE法检测CTL对靶细胞的杀伤活性.结果:ELISPOT和胞内因子染色实验结果显示,长肽P315-338和P375-401诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力.CFSE和LDH细胞毒实验结果显示表位P315-338和P375-401对靶细胞有一定的杀伤作用.结论:成功筛选并鉴定出针对肺癌抗原COX-2的2条长肽.这2条长肽具有用作免疫治疗疫苗的潜能.
