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pVAX1/SjHGPRT·SDISP文献资料
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抗日本血吸虫pVAX1/SjHGPRT·SDISP多价疫苗的构建方法探讨
目的:探讨抗日本血吸虫生殖产卵编码基因多价疫苗pVAX1/SjHGPRT· SDISP的构建方法并从基因与蛋白水平验证该构建方法是否成功.方法:分别以pcDNA3.0/SjHGPRT、pcDNA3.0/SjSDISP为模板,设计引物扩增SjHGPRT、SjSDISP,采用overlap 方法扩增全长SjHGPRT· SDISP.将纯化后的产物SjHGPRT· SDISP以及pVax1质粒采用Kpn I和Xba I双酶切,1%低熔点胶回收目的DNA片段以及酶切后Pvax1载体片段双胶连.连接产物转化至DHSα细胞.挑选阳性克隆采用双酶切以及测序方法从基因水平鉴定是否构建成功.将构建产物免疫观察动物,采用免疫组化方法从蛋白水平鉴定疫苗pVAX1/SjHGPRT·SDISP是否构建成功.结果:酶切方法以及测序结果均显示重组质粒的插入序列分别与目的基因完全一致,昆明小鼠肌肉组织酶免疫组织化学染色显示免疫组小鼠肌细胞中呈现较强的棕黄色颗粒,而阴性对照组肌细胞呈阴性.结论:真核重组质粒pVAX1/SjHG-PRT·SDISP构建成功,且在昆明鼠肌肉细胞内能够获得良好的表达.
关键词： 血吸虫 pVAX1/SjHGPRT·SDISP 多价疫苗 构建
