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14-3-3θ基因过表达载体的构建及其过表达乳腺癌细胞株的建立
目的:为进一步研究14-3-3θ基因对乳腺癌生物学行为的影响,构建14-3-3θ基因真核细胞过表达重组载体并建立其过表达的乳腺癌细胞株.方法:合成的14-3-3θ基因重组在pENTR 3C DUAL载体中,课题组采用DNA重组技术将14-3-3θ基因剪切分离后,插入真核表达质粒载体pcDNA4.0中,重组得到真核过表达载体pcDNA4.0-14-3-3θ,并用其转染293T细胞后用westernblot进行验证,将经过验证的真核过表达载体pcDNA4.0-14-3-3θ转染乳腺癌细胞后用zeocin筛选,筛选出的乳腺癌细胞经过western-blot和PCR验证确为稳定过表达14-3-3θ的乳腺癌细胞.结果:成功构建14-3-3θ基因过表达真核载体并建立其过表达乳腺癌细胞株,揭示14-3-3θ基因可能在乳腺癌的早期诊断和预后预测中具有重要作用.
