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DNase-非序列依赖的单引物扩增文献资料
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感染性疾病RNA病毒性病原体生物信息学检测方法的建立
目的 以艾滋病病毒(HIV)为研究对象,建立感染性疾病RNA病毒性病原体的生物信息学检测方法.方法 应用DNase-非序列依赖的单引物扩增技术,将艾滋病患者血清过滤后,经DNase处理去除血清中的内源DNA,提取血清病毒RNA,反转录合成病毒RNA的双链cDNA,Taq I酶切双链cDNA,加接头分子,并以接头分子为引物非特异扩增病原基闪;PCR产物克隆后,酶切鉴定并测序,经GenBank BLAST软件进行序列分析.结果 非序列依赖的单引物扩增HIV患者血清中外源基因得到多个DNA片段;重组克隆质粒经EcoR I和Hind Ⅲ双酶切,可见插入片段存在;将所有PCR产物测序,序列与已知病原基因序列一致.结论 应用DNase处理及非序列依赖的单引物扩增方法可以检测RNA病毒性病原体.
