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SUMO融合表达文献资料
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成纤维细胞生长因子-21[Arg59]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化
目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础.方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21 cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变体片段与SUMO分子伴侣相连后插入表达载体pET20b,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析、酶切和除盐等纯化分析.结果:PCR扩增出约546 bp的特异性片段,测序分析表明已成功引入突变;所构建的pET20b-SUMO-FGF21[Arg59] 重组阳性克隆经PCR与双酶切鉴定及测序分析,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约31 500,且为可溶性;Western blotting分析证实:纯化后产物是成熟的FGF21[Arg59] 突变体蛋白.结论:成功构建FGF21[Arg59] 突变体基因,并经表达纯化得到成熟的FGF21[Arg59] 突变体蛋白.
关键词： 成纤维细胞生长因子-21 突变体 SUMO融合表达 纯化
