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新阿波罗栖热袍菌(DSM 4359)文献资料
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Thermotoga neapolitana葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及其酶学性质
目的:从新阿波罗栖热袍菌Thermotoga neapolitana (DSM 4359)中克隆葡萄糖苷酶基因,并将其转化进大肠杆菌中进行体外表达,研究重组酶的酶学性质.方法:以Thermotoga nea politana基因组DNA为模板,根据该基因序列设计引物,采用PCR法扩增出葡萄糖苷酶基因,将其连接到pET-28a(+)载体上,转化入E.coli BL21 (DE3)宿主菌中.经IPTG诱导体外高效表达.研究重组酶的适反应温度、pH值和底物特异性.结果:PCR扩增得到825 bp的片段,编码274个氨基酸,并连接到载体pET-28a(+)上,成功转化到宿主菌中,并在体外进行了高效表达.丙烯酰胺凝胶电泳,目标蛋白相对分子质量约为63 000.重组酶的适反应温度为75℃,在70℃～85℃范围内仍保持60％以上活力.适反应pH值为5.0,在pH 3.0～6.0范围内仍能保持70％以上活力.适底物为海藻糖,其次为龙胆二糖,其他糖苷键连接的二糖的活力均很低或没有活力.结论:Thermotoga neapolitana (DSM 4359)中葡萄糖苷酶基因成功克隆并表达于大肠杆菌中.葡萄糖苷酶能特异性水解α-(1→1)糖苷键.
关键词： 新阿波罗栖热袍菌(DSM 4359) 葡萄糖苷酶 重组表达 基因
