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miR-125 b靶向Smad4调控非创伤性股骨头坏死骨髓基质干细胞成骨分化与增殖的相关性
目的：探讨miR-125靶向Smad4调控对非创伤性股骨头坏死骨髓基质干细胞成骨分化与增殖的影响。方法培养人骨髓基质干细胞系HMSC-bm，将miR-125b 模拟物（ mimics）、miR-125b 抑制物（ inhibitor）和对照（ miR-NC）转染到细胞内，qRT-PCR和 Western印迹检测过表达对Smad4表达的影响，构建野生型和突变型的Smad4的3′-UTR荧光素酶报告载体，分别命名为 Wt-Smad4和 Mut-Smad4，将构建好的质粒做三组共转染，即Wt-Smad4与miR-125b mimics、Mut-Smad4和miR-125b mimics以及miR-NC与miR-125b mimics，检测荧光素酶的活性；BMP-2诱导HMSC-bm分化，将miR-125b mimics和si-Smad4转染到分化的细胞内，以不转染的细胞作为参照，检测 miR-125b 靶向 Smad4对细胞分化的影响；将 miR-125b mimics、miR-125b inhibitor和miR-NC转染到对数生长期的HMSC-bm细胞系，胆囊收缩素（CCK）8检测过表达对细胞增殖的影响；将miR-125b mimics与pcDNA3.1-Smad4质粒共转染；miR-125b mimics；miR-NC 组；miR-NC 与 pcDNA3.1-Smad4组转染到 HMSC-bm 细胞系，检测 miR-125b靶向 Smad4对细胞增殖和分化的影响。结果转染 miR-125b mimics组Smad4的相对表达量显著低于miR-125b NC组，转染miR-125b inhibitor组Smad4的相对表达量显著高于miR-125b NC组（P＜0.01），Western印迹的检测结果与其一致，荧光素酶结果显示，Wt-Smad4与miR-125b mimics组荧光素酶活性显著低于miR-NC与miR-125b mimics组（P＜0.01），结果证实Smad4是miR-125b的靶基因；miR-125b mimics和si-Smad4组Runx2和Osterix mRNA表达量显著低于对照组（P＜0.01）；CCK8检测结果显示，miR-125b mimics组在24 h、48 h、72 h 3个时间点细胞的增殖率显著高于对照组（P＜0.01），miR-125b inhibitor 组在3个时间点的细胞增殖率显著低于对照组（P＜0.01）；miR-125b靶向Smad4对细胞增殖分化的影响试验结果显示，miR-125b mim-ics组细胞增殖显著高于miR-NC组（P＜0.01），miR-125b mimics与pcDNA3.1-Smad4质粒共转染组细胞增殖显著高于miR-NC（P＜0.05），miR-NC与pcDNA3.1-Smad4组细胞增殖显著低于miR-NC组（P＜0.05），miR-125b mimics组和miR-125b mimics＋pcDNA3.1-Smad4组细胞中 Runx2和 Osterix的mRNA相对表达量显著高于miR-NC组（ P＜0.01）；miR-NC＋pcDNA3.1-Smad4组细胞中 Runx2和 Osterix 的 mRNA 相对表达量显著低于 miR-NC 组（P＜0.01）。结论 Smad4是miR-125b的靶基因，上调miR-125b促进细胞增殖，下调miR-125b减弱细胞增殖，miR-125b靶向 Smad4调控 HMSC-bm细胞增殖和分化。
