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高效液相色谱法提纯和分离酵母苯丙氨酸tRNAphe ASL
通过用特殊树脂Nucleogen-DEAE 阴离子交换柱可有效地提纯和分离酵母苯丙氨酸tRNAphe ASL不同核苷酸的聚核苷酸 .经反相高效液相色谱进行定量核苷组分分析, 确认是否掺入了修饰的核苷, 用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度检查.
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尿嘧啶与假尿嘧啶核苷甲基化对酵母tRNAphe反密码环结构与功能的影响
酵母苯丙氨酸tRNAphe反密码区域核苷修饰的几率和种类远超过T环和D环.在17个核苷酸的序列中,5种转录后的自然修饰在32,34,37,39和40位.为研究核苷修饰与结构和功能的关系,需建立一种研究方法和模型体系,从技术上,本方法和化学修饰核苷[1]、自动合成、色谱法纯化和定性分析[2]、热变性和热力学分析[3]、生化检测[4]5个不同学科相关.为探讨一种系统的方法,测定修饰核苷对酵母苯丙氨酸tRNAphe反密码环结构与功能的影响,从原子水平上区别和理解尿嘧啶和假尿嘧啶甲基化对结构与功能的影响,进行了以下的实验研究.
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核苷甲基化对酵母tRNAPhe反密码环结构与功能影响的研究
通过用甲基选择性地取代核苷的氢原子,研究修饰的全面贡献.实验表明某些情况下核苷甲基化仅能略微地改变局部残基构象,而在另一些情况下却能显著地改变构象.
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修饰核苷对酵母tRNAphe反密码区域的贡献
采用单独或结合方式掺入自然出现的修饰核苷,合成酵母苯丙氨酸反密码区域17聚体tRNApheAC,测定其van't Hoff 热力学参数.从原子水平上理解ψ39,m1G37,m5C40,dm5C40,Cm32,Gm34对结构与功能的贡献.