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长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶的分离纯化
目的建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的方法.方法将长白山白眉蝮蛇蛇毒溶解后离心,取上清进行阴离子交换层析,所得蛋白进行分子筛层析.提纯的蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定及相对分子量测定.测定酶的N-末端氨基酸序列.结果经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一区带,相对分子量为35.5kDa.N-末端氨基酸序列分析表明其N-末端氨基酸序列与立止血中巴曲酶N-末端氨基酸序列基本一致.提取率约为5mg类凝血酶/g蛇毒.结论用上述方法可制得高纯度的类凝血酶.
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长白山白眉蝮蛇血凝酶的分离纯化研究
目的:建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇血凝酶的方法.方法:先后采用分子筛层析法、离子交换色谱法、肝素-Sepharose亲和层析法从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一种具有有凝血活性的酶成分,并采用SDS-Page法、RP-HPLC法测定其纯度,凝胶电泳法(SDS-Page)考察其对牛纤维蛋白原的作用方式、高效空间排阻色谱法(HPSEC)测定其相对分子质量,等电聚焦电泳分析法(IEF)测定其等电点,Lowry法测定其蛋白浓度.结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化了一种凝血酶成分,SDS-Page显示为一条带,HPLC得到单一的色谱峰,该酶只作用于纤维蛋白原的α链,其相对分子质量为32.2 kD,等电点为5.21,此酶具有体外凝血活性.结论:该方法可用于长白山白眉蝮蛇血凝酶的分离纯化.
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长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化方法研究
目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法.方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果.结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAGE电泳显示为一条带,分子量大约为35.5 kDa,达到电泳纯.理化性质研究表明,此类凝血酶具有体外凝血活性,体外凝血酶比活力为12.57IU·mg-1,用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐测得该酶的精氨酸酯酶比活力为137.65IU·mg-1.用蛋白酶抑制剂和乙二胺四乙酸对该酶进行抑制实验,结果表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,而不是金属蛋白酶.结论:本方法可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化.
