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钙黏蛋白11和核心结合因子α1双基因修饰人骨髓间充质干细胞
背景:钙黏蛋白11对骨髓间充质干细胞进行基因修饰,可促进细胞的黏附性能.利用核心结合因子α1对骨髓间充质干细胞进行基因修饰,有望实现多能干细胞的成骨定向分化,并在诱导成骨分化的级联效应中发挥重要的信号作用.目的:拟采用腺病毒为载体,介导钙黏蛋白11、核心结合因子α1基因修饰骨髓间充质干细胞,观察两基因的表达情况.设计、时间及地点;细胞-基因学实验,于2008-08在珠江医院中心实验室完成.材料:人骨髓间充质干细胞来源于1例胸椎骨折男性患者,由珠江医院提供,患者对实验知情同意.钙黏蛋白11全长cDNA质粒由日本神户理研Riken分子生物中心Takeichi教授惠赠,全长核心结合因子α1基因质粒由美国Baylor医学院Ducy博士提供,pAdeasy腺病毒系统由美国约翰霍普金斯遗传所Bert博士馈赠.方法:Percoll密度梯度离心+贴壁法分离培养人骨髓间充质干细胞.利用PCR技术获得钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因,分别构建到腺病毒穿梭载体上,然后分别通过同源重组获得重组腺病毒质粒,再将两病毒质粒包装获得重组病毒液,后通过病毒将两基因导入骨髓间充质干细胞.主要观察指标:Western blot法检测钙黏蛋白11、核心结合因子α1基因在入骨髓间充质干细胞中的表达.结果:获得携带钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因的病毒液,将其感染人骨髓间充质干细胞后,以Wastern blot检测两种基因同时获得高表达.结论:实验成功构建钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因腺病毒载体,通过病毒转染入骨髓间充质干细胞,二者获得高效表达.
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大鼠牙移动性根吸收组织内钙黏蛋白-11的表达
目的:检测大鼠牙移动根吸收组织中钙黏蛋白(Cadherin-11)的表达,探讨根吸收过程的分子机制.方法:选用Wistar大鼠建立牙移动根吸收模型；通过TRAP法验证根吸收模型是否成功.通过免疫组化染色,研究Cadherin-11在根吸收组织中的表达.结果:TRAP染色表明,在100g持续力的作用下,大鼠牙根可见明显的吸收；免疫组化分析显示Cadherin-11在根吸收组织中有表达;在一个加力周期中,Cadherin-11的表达随时间渐强.结论:Cadherin-11参与牙根的吸收过程,在根吸收过程中起调节作用.
