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督脉电针上调脊髓损伤早期大鼠Bcl-2 mRNA及蛋白的表达
背景:针灸对脊髓损伤后期神经功能的恢复具有明显的促进作用已得到客观证实,本课题组以往的实验已证实电针可抑制脊髓损伤早期细胞凋亡,但电针抑制细胞凋亡的机制尚不清楚.目的:通过原位杂交及免疫组织化学方法观察电针对凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响,探讨电针干预脊髓损伤早期细胞调亡可能的机制.设计:开放性动物实验.单位:解放军第二军医大学解剖学教研室,上海市针灸经络研究中心.材料:成年雄性SD大鼠,清洁级,鼠龄两三个月.Bcl-2原位杂交检测试剂盒(武汉博士德生物科技有限公司);Bcl-2抗体(1:200,Santa Cruz Biotechnology公司).方法:实验于2004-07/2005-12在解放军第二军医大学解剖学教研室完成.实验大鼠随机分为模型组、电针治疗组、甲基强的松龙组及假手术组.采用改良的Allen's垂击法致大鼠T10脊髓损伤,损伤后即刻进行督脉电针治疗,应用原位杂交和免疫组织化学方法结合图象定量分析法进行评估.主要观察指标:①脊髓损伤早期Bcl-2 mRNA和蛋白的表达.②电针对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响结果:实验过程中如遇动物死亡,及时补充,终42只大鼠进入结果分析.①假手术组有中等量的Bcl-2 mRNA及蛋白表达.模型组在脊髓损伤后6 h Bcl-2 mRNA表达有增高趋势,Bcl-2蛋白表达未见明显变化;伤后24 h Bcl-2 mRNA表达增高,Bcl-2蛋白表达也相应增高.电针组Bcl-2 mRNA及蛋白表达均高于模型组(P＜0.05),与甲基强的松龙组相比无显著性差异.②电针及甲基强的松龙治疗6 h组,Bcl-2 mRNA阳性细胞数增加,灰度值降低,与假手术组和模型组相比差异有显著性和非常显著性意义(P＜0.05～0.01).电针24 h治疗组,Bcl-2 mRNA阳性细胞数显著增高,灰度值降低,与假手术组及模型组相比差异均具有显著性和非常显著性意义(P＜0.05～0.01).③电针24 h治疗组,Bcl-2免疫阳性细胞明显增加,灰度值降低,与假手术组和模型组相比,差异具有显著性和非常显著性意义(P＜0.05～0.01).结论:电针可上调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,进而对脊髓损伤早期细胞调亡具有部分抑制作用.
