首页 > 文献资料
-
猪脱细胞软骨基质生物相容性及细胞毒性评价系统的建立
背景:相对于其他用于支架材料的高分子化合物,脱软骨细胞基质能够模拟出更接近原生理状态下的细胞外环境,由其制备的椎间盘支架弹性模量也更加接近软骨组织.目的:制备脱细胞软骨基质,并从细胞和活体两方面评价其生物相容性.方法:将猪软骨粉碎后,经胰酶、核酶及TritonX-100处理得到脱细胞软骨基质.①细胞毒性实验:将脱细胞基质溶于醋酸,制备成脱细胞基质膜.将SD大鼠腰椎终板软骨干细胞接种于脱细胞基质膜上,培养1-5 d,采用CCK-8检测软骨干细胞在基质膜上的增殖情况,评价细胞毒性分级;②动物体内毒性实验:将含有脱细胞基质的醋酸(实验组)与醋酸(对照组)分别注射至SD大鼠背部皮下,形成皮丘,注射后36 h内观察大鼠体温与皮丘直径变化.结果与结论:①细胞毒性实验:倒置显微镜下可见,腰椎终板软骨干细胞接种于脱细胞基质膜2 d即贴壁,呈梭形生长,接种5 d内的细胞相对增殖率均在80%以上,细胞毒性分级为0至1级;②动物体内毒性实验:注射后即刻,两组大鼠背部均可见皮丘形成,注射36 h内皮丘内溶液被完全吸收,并且对照组吸收速度快于实验组,两组皮丘边缘均无红肿现象;注射36 h内,实验组与对照组大鼠体温均未超过37.5℃;③结果表明:脱细胞软骨基质具有很好的生物相容性,符合生物支架选材标准.
-
脱细胞软骨基质对于大鼠腰椎终板软骨干细胞分化的影响
[目的]制备家猪脱细胞软骨基质,探索其对大鼠腰椎终板软骨干细胞分化的影响.[方法]通过胰酶、核酶及TritonX-100制备脱细胞软骨基质,将软骨基质溶于双蒸水制得脱细胞软骨基质膜.将大鼠腰椎终板软骨干细胞种植于基质膜上,CCK-8检测1、3、5d的增殖情况,并与空白板对照.取P3代终板软骨干细胞种植于铺有软骨基质的孔板(DEPM组)和两组空白板(正常诱导组和无诱导组),然后进行成骨、成脂肪及成软骨分化诱导,2周后,茜素红、油红O及番红染色,分别鉴定其成骨、成脂肪及成软骨能力;每组取4孔按500 ul/孔加入DMSO,置于酶标仪上,在450 nm波长下检测各组的吸光度.同时Real-Time PCR分别检测成骨、成脂肪及成软骨特征性基因Runx2、Col-2a1和PPARγ在各组中的相对表达量,分析干细胞在软骨基质上的分化倾向性.[结果]大鼠腰椎终板软骨干细胞能够在脱细胞软骨基质上生长,并与其有很好的组织相容性.将终板软骨干细胞进行诱导后染色发现,DEPM组的干细胞具有更强的成骨分化能力,较低的成脂肪及成软骨分化能力.Real-Time PCR检测成骨基因Runx2在DEPM组较其他两组呈较高表达,而Col-2a1和PPARγ基因表达较低.在450 nm波长下,DEPM组中的成骨吸光度大,大于其他两组,成脂肪及成软骨的吸光度小于正常诱导组.[结论]脱细胞软骨基质能够较好的保持干细胞成脂肪及成软骨的分化特性,但是促进干细胞向成骨方向分化.
