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体外培养人羊膜上皮细胞的表型及分化能力
背景：人羊膜上皮细胞具有多系分化能力，是再生医学中重要的细胞来源。目前的研究多集中于对其分化能力的考察，而体外培养过程中羊膜上皮细胞的生物学特征如何变化尚不清楚。
目的：分析体外培养对人羊膜上皮细胞生长、表型及向心肌样细胞分化的能力等生物学特性的影响，探讨原代人羊膜上皮细胞干性标志物SSEA-4的表达水平与人羊膜上皮细胞生物学特性变化之间的关联性。
方法：使用统一分离方法获得原代羊膜上皮细胞并进行体外培养。利用CCK-8、流式细胞仪及real-time PCR等手段检测不同培养阶段人羊膜上皮细胞的增殖、表型以及向心肌样细胞分化的能力。
结果与结论：不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达在26.7%-97%，存在很大的个体差异。并且，随着传代次数的增加，人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平显著降低，其下降程度与原代SSEA-4的表达水平无关。另外，培养后人羊膜上皮细胞的心肌分化潜能也存在很大个体差异，且其差异与原代人羊膜上皮细胞的 SSEA-4表达水平的高低无关。结果提示，不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的 SSEA-4表达水平受到个体差异的影响，需要建立更准确的临床样本筛选指标来稳定获得原代高表达 SSEA-4的胎儿样本，以实现对人羊膜上皮细胞的质量监控。另外，体外培养过程中 SSEA-4的表达水平受到培养条件的影响，需要继续优化培养条件以维持其高表达。此外，人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力受到样本个体差异以及培养条件的影响，在今后还需要进一步研究。 -
三维培养hESCs来源视杯样组织中c-kit和SSEA-4的时空表达特点研究
目的 研究人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)三维培养后形成的视杯样组织中c-kit和SSEA4表达的时空特性.方法 H1人胚胎干细胞行三维培养和神经诱导分化,在分化7、14、21、30、49、70、90 d固定组织并行免疫荧光鉴定检测c-kit和SSEA-4的表达,同时在相应时间点将分化组织消化成单细胞行流式细胞仪检测验证.结果 三维培养第14天可见Rax+视泡(optic vesicle,OV)样结构,第30天形成具有内层Pax6+、外层Mitf+的双层视杯样(optic cup,OC)结构,第90天可见部分Crx+细胞.c-kit主要表达于hESCs来源OV状及OC状的神经上皮样结构中,SSEA-4早期均匀表达于整个组织,晚期则主要集中于周边部.c-kit+细胞比例呈先升高(P＜0.01)后下降(P＜0.01)趋势,并在分化14 d达40％的峰值.SSEA-4+细胞比例从分化0d至70 d持续下降(P＜0.01),直到90 d一直维持于该低水平.结论 在三维培养hESCs来源OV或OC状组织中,c-kit基因随诱导分化而激活,且主要表达于神经上皮层,呈先增高后下降趋势.SSEA-4早期高表达于整个组织,之后逐渐减少至周边部并维持于低水平状态.
