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嗅鞘细胞移植后脊髓损伤区髓磷脂相关糖蛋白表达的动态变化
目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓损伤区轴突生长抑制因子髓磷脂相关糖蛋白的影响.方法:实验于2005-08/2006-02在西安交通大学教育部环境与疾病相关基因研究重点实验室完成.①选取成年SD大鼠40只,随机数字表法分为正常组、模型组、DF12对照组、嗅鞘细胞组,10只/组.②除正常组外,其余各组均建立脊髓全横断损伤模型.术后嗅鞘细胞组在距损伤缘上下各1 mm处注射原代培养12 d的成年大鼠嗅鞘细胞悬液,浓度凋整为1×1011L-1,深度均为1.0 mm,每处各注射细胞悬液1μL.DF12对照组注射DF12培养液,方法与剂量同上.模型组、正常组均不进行任何移植处理.③分别于移植后1,4,8周采用组织学、行为学方法和免疫印迹技术检测各组动物脊髓损伤区髓磷脂相关糖蛋白表达的变化.结果:实验选取40只SD大鼠均进入结果分析.①组织学检查嗜银染色结果:移植8周后除正常组外,其余各组均可见明显的神经纤维再生,但模型组、DF12对照组大部分纤维排列紊乱如乱发状,明显迂曲;而嗅鞘细胞组新生轴突明显,无论数量还是质量都优于模型组及DF12对照组.②移植后不同时间点各组下肢运动功能检测BBB评分结果的比较:移植1,4,8周,嗅鞘细胞组BBB评分均明显高于模型组、DF12对照组,且移植4,8周时差异有显著性意义[(5.25±1.28),(1.62±1.50),(2.25±1.03)分;(11.5±2.20),(4.37±1.84),(3.75±1.03)分;F=18.090～47.635,P均＜0.01].③髓磷脂相关糖蛋白western blot检测结果:模型组、DF12对照组、嗅鞘细胞组脊髓损伤后髓磷脂相关糖蛋白的表达明显增强,均明显高于正常组(P＜0.05);但嗅鞘细胞组明显低于模型组、DF12对照组(P＜0.05).结论:嗅鞘细胞移植可能通过降低脊髓损伤后损伤区髓磷脂相关糖蛋白的表达,从而促进损伤脊髓的修复.
关键词： 髓磷脂相关糖蛋白 嗅觉受体神经元/移植 脊髓损伤 免疫印迹法 -
切断周围神经后局部嗅鞘细胞移植对脊髓及神经节内神经元的作用
目的:观察周围神经切断后局部嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓及神经节内神经元的作用,为嗅鞘细胞移植治疗周围神经损伤提供实验依据.方法:实验于2005-08/2006-01在西安交通大学医学院动物实验中心完成.选用健康成年SD大鼠55只,随机数字表法分为3组:对照组25只、实验组25只、空白组5只.①对照组与实验组大鼠在坐骨切迹处游离坐骨神经的各分支,在远端切断,在半腱肌内侧肌膜上切口,将坐骨神经近断端的各游离分支包埋进肌肉,神经外膜与肌膜缝合固定,实验组在缝合口两侧2mm处肌肉中各注射1×109 L-1的嗅鞘细胞0.1 mL,对照组注射细胞培养液DMEM.空白组仅暴露坐骨神经而不进行切断.②术后1,2,3,7和14 d,分批处死对照组和实验组大鼠,每次5只,空白组于14 d后处死,分别进行病理及TUNEL法观察神经元的改变.结果:实验共选用大鼠55只,全部进入结果分析.①坐骨神经损伤后各组不同时间点苏木精-伊红染色观察伤侧前角运动神经元存活率变化:术后7,14 d,实验组大鼠脊髓前角运动神经元的形态改变与对照组相似,但变性数目明显少于对照组,存活神经元数目明显多于对照组(P＜0.01).②坐骨神经切断后各组坐骨神经损伤侧前角运动神经元凋亡指数变化:在术后第3,7,14天,对照组明显多于实验组[(2.1±1.1)%,(1.2±0.8)%;(3.1±1.1)%,(1.4±0.6)%;(6.1±1.8)%,(4.1±1.3)%,P＜0.05].③坐骨神经切断后各组坐骨神经损伤侧神经节神经元凋亡指数变化:7,14 d时,实验组的神经节内的感觉神经元凋亡阳性细胞要较对照组少[(2.1±0.32)%,(4.4±0.56)%;(4.3±1.8)%,(6.7±2.5)%,P＜0.05].结论:在周围神经损伤后脊髓及神经节内神经元有凋亡发生,嗅鞘细胞移植对神经元凋亡有保护作用.
