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组合酶消化法文献资料
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比较机械分离法和组合酶消化法分离大鼠生精细胞的差异
目的:采用机械分离法和组合酶消化法分离大鼠生精细胞,比较两者在细胞数量、细胞纯度及存活率等方面的优劣.方法:实验于2007-03/05在广东省人民医院医学研究中心进行.分别采用机械分离法和组合酶消化法分离成年SD大鼠睾丸生精细胞,即机械分离法采用锐性分离结合筛网过滤,依次将间质细胞、血细胞剔除,经过滤筛选后,获得较为纯净的生精细胞,后经差速贴壁法获得纯度较高的生精细胞.组合酶消化法采用胶原酶和胰酶消化相结合的方法,首先用胶原酶Ⅳ将间质细胞分离出来,经胰酶消化后获得单细胞的生精细胞悬液.分析比较两者所得细胞总数及细胞纯度的差异,并检测分离培养前后细胞存活率的变化.结果:组合酶消化法分离的生精细胞数量与机械分离法相当,两者比较差异无显著性意义(P＞0.05).但机械分离法所得生精细胞的纯度高于组合酶消化法,并且分离培养前后细胞存活率也明显高于组合酶消化法,两两比较差异均有显著性意义(P＜0.05).机械分离法所得生精细胞悬液中以支持细胞混杂为主,而组合酶消化法则混杂较多支持细胞和间质细胞.结论:机械分离法分离生精细胞纯度高、细胞存活率高及费用低,是一种简单、经济、有效的生精细胞分离方法.
