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半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)文献资料
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补硒糖尿病大鼠ABCa5基因克隆鉴定与表达
目的 克隆补硒糖尿病大鼠三磷酸腺苷(ATP)结合盒(ABC)转运蛋白A亚族的成员之一-ABCa5基因片段并检测其在肝脏中的表达水平.方法 将前期分离到与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段(简称差显片段)进行克隆、测序和同源性分析,并对ABCa5基因片段重新设计特异性引物,进行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,观察其在各组大鼠肝脏组织中表达的变化.结果 发现差显片段Se-12的碱基序列与ABCa5基因的同源性为99%.RT-PCR结果表明,与正常对照组(NC)(0.572 9±0.024 1)相比,糖尿病对照组(DM)(0.160 6±0.007 5)和糖尿病补硒组(DM+Se)(0.385 7±0.019 4)中ABCa5基因mRNA的表达水平明显降低,但DM+Se组中的该mRNA表达水平较DM组有所升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCa5在糖尿病的发病及代谢过程中起着一定的调节作用;补硒可以上调糖尿病大鼠肝脏中ABCa5 mRNA的表达水平,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一.
关键词： 硒 糖尿病 基因表达 半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR) ABCa5
