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滑膜细胞原代体外培养体系的建立
目的:改善体外分离、培养滑膜细胞的方法,并对其鉴定.方法:取人滑膜组织采用机械分离、复合酶消化后再将组织块塑料孔板倒贴法,差速贴壁法纯化后培养,倒置显微镜观察生长情况,HE染色,细胞活力测定,免疫组化鉴定.结果:分离培养的滑膜细胞呈梭形或柱形,核呈卵圆形位于细胞中央,生长好、纯度高.细胞活力测定大于95%,免疫组化鉴定:波形蛋白vimentin(+),CD68(-).结论:成功分离了人滑膜细胞,方法简便易行,为进一步研究提供良好的实验模型.
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新生猪胰岛细胞团的体外培养体系
目的 曲分离纯化新生猪胰岛细胞团(NPCCs),以不同的体外培养方式促进NPCCs成熟,筛选佳方案.方法 利用供龄分别为3天的新生猪,参考Bonner-Weir法和Hill法分离纯化NPCCs,分别以培养体系I(90%DMEM、10%胎牛血清、双抗、2 mmol/L谷氨酰胺+0.01%大豆胰酶抑制剂)和培养体系Ⅱ(90% DMEM、10%胎牛血清、双抗、2 mmol/L谷氨酰胺+0.01%大豆胰酶抑制剂、10 mmol/L烟碱、10 ng/mL表皮细胞生长因子、15 ng/mL胰岛索样生长因子)体外培养14天,进行抗胰岛素、抗CK7双荧光染色和胰岛素刺激释放实验.结果 应用培养体系I的NPCCs体外培养14天时,抗胰岛素阳性细胞(β细胞)百分比为(28.6±5.3)%.显著低于培养体系Ⅱ的(62.1±9.0)%(P＜0.01);培养体系Ⅰ的抗CK7阳性细胞(原始导管细胞)百分比为(52.8±7.2)%,显著高于培养体系Ⅱ的(21.5±6.9)%(P＜0.01).培养体系Ⅰ的NPCCs体外培养14天时胰岛素刺激释放量为:低糖:(14.3±4.8)mU/L,高糖:(23.9±6.2)mU/L,高糖+茶碱:(38.5±8.2)mU/L,显著低于培养体系Ⅱ的释放量:(26.2±5.1)mU/L、(46.3±7.0)mU/L、(81.5±10.4)mU/L(P＜0.01).结论 培养体系Ⅱ较培养体系Ⅰ更能促进NPCCs中B细胞发育成熟及CK7阳性细胞向β细胞转化,并使胰岛素刺激释放量提高.培养体系Ⅱ是微囊和移植前体外培养NPCCs的理想方案之一.
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碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶1的影响
本研究通过建立增生性瘢痕Fb体外培养体系,观察不同浓度外源性bFGF对细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)表达的影响,初步分析前者对后者的调控作用.
