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葡萄胎组织中c-Ha-ras基因突变的初步研究
目的:为了在分子水平了解c·Ha-ras基因在葡萄胎疾病中的变化,寻找预测葡萄胎恶变的途径.方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法测定恶变与非恶变组葡萄胎组织中c-Ha-ras基因突变的情况.结果:c-Ha-ras第12位密码子的突变率恶变组为60.0%,未恶变组为26.7%,二者具有显著性差异(P＜0.05).在正常绒毛组织中无1例恶变.结论:c-Ha-ras第12位密码子的突变可能与葡萄的恶变率增高有关.
关键词： 葡萄胎 c-Ha-ras基因 恶变 突变 -
p53和C-Ha-ras基因在胃癌发生中的作用
目的探讨p53和C-Ha-ras基因突变在胃癌发生中的作用.方法用PCR-SSCP和直接测序检测胃癌组织中C-Ha-ras(12、13密码子)和p53(外显子7)基因的突变.结果胃癌组织中C-Ha-ras和p53基因突变发生率显著高于浅表性胃炎和正常胃黏膜组织,基因的联合突变在部分胃癌组织中表达.结论基因联合突变可能是胃癌发生的机制之一.
关键词： p53基因 c-Ha-ras基因 胃癌 -
c-Ha-ras癌基因反义RNA抑制膀胱癌细胞生长及粘附的研究
目的 研究降低c-Ha-ras癌基因表达对膀胱癌细胞生长和粘附的影响.方法 将反义c-Ha-ras基因导入膀胱癌细胞系TBC-1细胞株,筛选阳性细胞克隆.Southern杂交鉴定外源基因整合情况,荧光分光光度法检测c-Ha-ras表达,绘制生长曲线,体外检测细胞粘附率.结果 筛选出细胞克隆TBC-neo和TBC-antiras,放射自显影显示只有TBC-antiras有外源性c-Ha-ras杂交带,亲本细胞TBC-1和对照细胞TBC-neo只有内源性杂交带,与TBC-1(39.7±6.2,32.8%)和TBC-neo(43.2±5.7,35.7%)相比TBC-antiras细胞的c-Ha-ras蛋白水平(25.6±4.2)及粘附率(16.4%)明显降低(P＜0.05).生长曲线显示TBC-antiras生长受到抑制.结论 降低c-Ha-ras癌基因表达抑制膀胱癌细胞生长和粘附 ,针对ras癌基因或癌蛋白的药物可为膀胱癌的临床治疗提供新途径.
关键词： 膀胱癌 反义RNA c-Ha-ras基因 生长 粘附 -
c-Ha-ras基因3′端可变串联重复序列位点遗传多态性与葡萄胎的恶变关系
目的探讨遗传标记物c-Ha-ras基因3′端可变串联重复序列(variable numbers of tandem repeats,VNTR)在妊娠滋养细胞疾病中的变化,以了解DNA来源与葡萄胎恶变的关系.方法用扩增片段长度多态性-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对c-Ha-ras基因3′端VNTR位点进行分析,将患者病变组织与其父母的DNA扩增结果进行对照,以判定病变组织DNA的来源.结果在15组病例中,仅有2例葡萄胎组织的DNA扩增片段全部来自父方;既来自父方又来自母方者有13例,其中2例来自父母双方的比例是一样的,11例来自父方的比例大于来自母方的比例.结论 DNA来自父母亲双方的,且来自父方的比例大于来自母方比例的葡萄胎组织易于发生恶变.
关键词： c-Ha-ras基因 可变串联重复序列 遗传多态性 葡萄胎 -
C57-ras转基因小鼠模型的建立
目的:建立用于临床前药物安全性致癌评价的人类原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠模型.方法:通过PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras,全长6.5 kb,含有4个外显子,以及该基因本身的启动子、调控序列和poly A信号序列;并将其通过原核注射注入C57BL/6J小鼠受精卵雄原核.通过PCR,real-time RT PCR和反转录cDNA测序比对等手段鉴定c-Ha-ras基因的插入和表达,并结合病理切片分析自发肿瘤的发生.结果:人类原癌基因c-Ha-ras在原核注射后的基因整合率达到1.6％,共得到人类c-Ha-ras基因的插入的首建鼠6只,其中3只得以成活,并且人类c-Ha-ras基因能够稳定遗传,建成C57-ras转基因小鼠系;C57-ras转基因小鼠反转录cDNA测序比对与人源c-Ha-ras一致;3个转基因小鼠系c-Ha-ras基因的表达分别是野生型小鼠的70.53、59.07和99.68倍;病理切片分析,6只首建鼠中3只有自发肿瘤发生.结论:本研究成功建立了C57/B6J背景的人类c-Ha-ras转基因小鼠模型.该C57-ras转基因小鼠的制作和用途已申请专利(CN101532018A),这是我国首个以临床前药物致癌性实验为目的的c-Ha-ras转基因小鼠,也是在我国建立符合ICH规范的、拥有自主知识产权的临床前药物安全性致癌评价替代方法体系的基础.
