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精子抗原表位的研究进展
精子是一种隐蔽抗原，可引起机体产生抗精子抗体。抗精子抗体能够影响生殖细胞的结合、胚胎着床等过程，进而导致免疫性不孕不育。近年来，与免疫性不孕不育密切相关的抗精子抗体所结合的精子表面抗原及其抗原表位已成为抗精子抗体检测及避孕疫苗的主要研究对象之一。该文对与免疫性不孕不育相关的精子表面抗原及其抗原表位的筛选和鉴定，以及当前精子抗原表位研究所面临的难点作一简要的综述。
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ISCOMs作为粘膜免疫佐剂在避孕疫苗构建中的作用研究
目的探索有效提高避孕疫苗生殖道粘膜免疫的方法.方法将合成纯化的35多肽与皂甙QuilA、脂类混合物(等体积比的磷脂和胆固醇)以1∶4∶1比例混合,经充分透析后得到35肽-ISCOMs;将35肽-ISCOMs和35肽-弗氏佐剂混悬物分别免疫纯系BALB/c雌性小鼠,并比较免疫后小鼠生殖道内特异性IgA的动态变化以及小鼠生育力的变化.结果制备成功的35肽-ISCOMs在电镜下可见明显的、较规则的蜂巢样结构;35肽-ISCOMs免疫组IgA抗体在第10周时达高值(1∶600),约持续4周左右;而35肽-弗氏佐剂组IgA抗体在第14周时达高值(1∶300),约持续1周左右;35肽-ISCOMs免疫后小鼠的受孕率(14.3%)显著低于35肽-弗氏佐剂免疫组(60.0%).结论 ISCOMs可以显著提高抗原在生殖道内的粘膜免疫效应,增强抗生育作用,是一种极富潜力的粘膜免疫佐剂.
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鼠精子表面蛋白cyritestin在沙门氏菌平衡致死系统中的高效表达
目的构建表达鼠精子cyritestin蛋白的可口服减毒沙门氏菌活疫苗株.方法将编码成熟cyritestin蛋白cDNA序列的酶切片段插入含pUC复制子的表达载体pYA3339中,构建重组质粒pMCY,将该重组质粒转入鼠沙门氏伤寒杆菌疫苗株X4550,获得杂合菌株X4550(pMCY).应用western blot对重组菌所表达的重组cyritestin蛋白进行免疫分析.结果该无抗药性的杂合菌株在体外营养选择压力下可较稳定携带重组质粒传代繁殖,在体内可较稳定地定居于Peyer's结、肠系膜淋巴结和脾脏.该重组菌可高水平表达重组cyritestin蛋白.结论高效表达cyritestin蛋白的X4550(pMCY)疫苗株可用于免疫性避孕研究.
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免疫避孕疫苗的新研究进展
免疫避孕疫苗是利用多种实验技术,从参与生殖过程各要素中筛选出蛋白抗原或表位抗原,通过免疫避孕对象,在生殖道局部或全身产生中和抗体,从而影响和破坏生殖过程,起到延长妊娠间隔和避孕的作用.本文对免疫避孕现状和未来发展做一综述.
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生殖激素避孕疫苗现状及应用前景
作为避孕疫苗的生殖激素抗原主要有:GnRH、FSH 、LH及hCG.这些抗原显示了不同程度的避孕效应,其中,hCG疫苗是唯一进入Ⅱ期临床试验的避孕疫苗；而且,GnRH及hCG疫苗在非避孕方面具有广阔的应用前景.
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免疫避孕疫苗研究进展
应用免疫避孕疫苗控制生育越来越成为世界各国,尤其是发展中国家研究的重点.人们从精子、卵细胞和生殖激素中筛选出为适合的靶抗原用于免疫避孕疫苗.该文就近年来避孕疫苗的研究进展作一综述.
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真核表达质粒pSG ．SS ．C3d3．YL ．Bin1b雄鼠免疫避孕效应研究
目的：研究小鼠Bin1b真核表达重组质粒pSG ．SS ．C3d3．YL ．Bin1b的DNA疫苗雄鼠免疫避孕效应。方法应用pSG ． SS ．C3d3．YL ．Bin1b（C3d3‐Bin1b组）肌注免疫雄鼠，观察其精子活力及避孕效应，ELISA法检测雄鼠血清抗Bin1b蛋白IgG抗体大稀释度、IL‐2、INF‐γ、IL‐4、IL‐10水平。PBS组、空载体pSG ．SS ．YL组（空载体组）和pSG ．SS ．YL ．Bin1b组（Bin1b组）为对照组。结果 C3d3‐Bin1b组雄鼠精子活力、雌鼠受孕率、平均产仔数量显著降低，免疫避孕效果显著好于Bin1b组。C3d3‐Bin1b组雄鼠血清抗Bin1b蛋白IgG抗体滴度显著升高，血清IL‐2、INF‐γ浓度显著降低，血清IL‐4、IL‐10浓度显著增加。结论真核表达重组质粒pSG ．SS ．C3d3．YL ．Bin1b可有效诱导雄鼠产生免疫性避孕效应，效果优于pSG ．SS ．YL ．Bin1b。
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附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的原核表达及纯化
目的 构建人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的重组质粒pET28a(+)-Eppin,并研究该质粒在原核细胞中的表达及纯化.方法 本研究以人睾丸组织cDNA为模板获得人Eppin基因片段,将其插入pET28a(+)载体His6-Tag上游,构建重组质粒pET28a(+)-Eppin,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组人Eppin蛋白后,运用SDS-PAGE进行分析和鉴定.大量表达的重组Eppin蛋白经镍柱亲和层析进行纯化,并采用SDS-PAGE进行纯度分析.结果 PCR扩增出约381 bp的Eppin基因片段,双酶切及PCR鉴定证实Eppin基因成功插入pET28a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子量单位约为17 ku的重组蛋白,与预期结果一致;Eppin的表达量在IPTG诱导表达4h时高,约占菌体总蛋白的30%;重组蛋白主要在沉淀中出现,表明原核表达时重组Eppin蛋白以包涵体形式存在;经镍柱纯化后可得纯度高达95%的重组Eppin蛋白.结论 成功构建了人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白重组质粒pET28a(+)-Eppin,该质粒在原核系统中获得了高效融合表达,进一步纯化后可得高纯度的重组蛋白,为开展免疫避孕与生殖免疫的研究奠定基础.
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精子膜蛋白的研究进展
精子膜表面蛋白是精子功能得以实现的主要物质，对其进行深入研究能从蛋白质水平研究其生物学的功能、揭示其生物生殖的分子机制，进而为避孕疫苗的开发奠定了基础。本文就近年来精子膜蛋白的研究进展作一综述。
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表达精子抗原受精素β的重组沙门氏菌疫苗株的免疫性避孕效应研究
目的:探讨表达精子抗原受精素β胞外区的重组沙门氏菌疫苗株用作避孕疫苗的可行性.方法:应用表达精子抗原受精素β胞外区的两种重组沙门氏菌疫苗株X4632(pFEC)和X455()(pFEC)口服接种雌鼠,通过ELISA方法检测其激发雌鼠产生抗重组受精素β蛋白的血清IgG抗体和阴道分泌物IgA抗体滴度变化,并观察其诱导的雌鼠免疫性避孕效应情况.结果:重组X4632(pFEC)和X4550(pFEC)疫苗株不但可激发雌鼠产生高水平血清抗重组受精素β蛋白和抗菌体LPS IgG抗体,而且在阴道分泌物中可出现一定程度抗重组受精素β蛋白和抗菌体LPS IgA抗体.同时,口服免疫后的雌鼠生育能力明显降低,两实验组雌鼠妊娠率降低30～35%,一胎产仔数量平均降低64.76～65.64%.结论:表达精子抗原受精素β的重组沙门氏菌疫苗株可在小鼠中诱导免疫避孕效应.
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人绒毛膜促性腺激素(hCG)避孕疫苗临床研究概况
目的:人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)是近30年发展免疫避孕疫苗的首选抗原.以hCG的全β亚基为免疫原和以C末端109～145的37个氨基酸肽段为免疫原研制的避孕疫苗,通过了临床前的毒性与安全性试验,并完成了第一期、第二期临床试验.本文介绍hCG避孕疫苗在国际上的临床研究以及我国临床前预初试验的概况.
关键词： 人绒毛膜促性腺激素(HCG) 避孕疫苗 免疫避孕
