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白胡椒化学成分研究
目的:研究白胡椒的化学成分.方法:采用硅胶柱色谱和HPLC制备色谱方法分离纯化得到单体化合物,采用有机波谱方法鉴定化合物结构.结果:从白胡椒甲醇提取物中分离得到6个化合物,分别为泽泻醇(1),胡椒碱(2),胡椒醛(3),N-异丁基-(2E,4E,12Z)-十八烷基-1-酰胺(4),丁香酸(5),5-羟甲基糠醛(6).结论:化合物1为首次从该属植物中分离得到.
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川泽泻鲨烯合酶基因的原核表达研究
目的:构建川泽泻鲨烯合酶(squalene synthase,SS)基因的原核表达载体.方法:在建泽泻SS基因序列的基础上,采用RT-PCR技术,从川泽泻新鲜叶片中克隆得到SS基因,并在BL21(DE3)细胞中分别用不同的表达载体、IPTG浓度、温度诱导该蛋白表达.结果:该基因在大肠杆菌中表达,但为包涵体,将其克隆到带有GST标签的pGEX-6t-1载体中进行原核表达并未改善蛋白溶解性;30℃诱导蛋白表达佳;不同IPTG浓度对蛋白表达影响不大.结论:川泽泻的原核表达为后续对该基因的生物学功能及川泽泻品质改良奠定了基础.
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泽泻提取物三萜类成分含量测定研究
目的:建立紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法测定泽泻提取物中三萜类成分含量.方法:采用紫外-可见分光光度法,以5％香草醛(用冰醋酸配制)-高氯酸显色.在555 nm波长处测定吸光度,计算泽泻提取物总三萜含量;应用高效液相色谱法同时测定泽泻提取物中12个三萜类成分,采用Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈-5％甲醇水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长208 nm.结果:紫外-可见分光光度法测定总三萜含量,以23-乙酰泽泻醇B计,质量浓度在5.9～15.6 μg·mL-1范围内与吸光度值呈良好线性关系(r =0.999 1),平均加样回收率99.05％,RSD为2.3％;高效液相色谱法测定12个泽泻三萜类成分含量,在考察的浓度范围内,线性关系良好(r ＞0.999 0),回收率均在95.89％～ 99.33％范围内,RSD为2.0％ ～3.4％.泽泻提取物中12个三萜类成分的含量:泽泻醇A 5.71％ ～5.95％、泽泻醇B 3.47％～ 3.99％、泽泻醇C 2.53％ ～2.97％、泽泻醇G 3.07％ ～ 3.93％、泽泻醇L 3.65％ ～ 3.99％、23-乙酰泽泻醇A 2.39％～3.02％、23-乙酰泽泻醇B 10.56％～ 11.32％、23-乙酰泽泻醇C 9.44％ ～9.86％、16-羰基-23-乙酰泽泻醇A 0.63％ ～ 3.14％、16-羰基-24-乙酰泽泻醇A 1.08％ ～1.21％、11-去氧泽泻醇B 2.29％ ～2.85％、24-乙酰泽泻醇A 4.04％～5.02％.结论:经方法学验证,本文建立的紫外-可见分光光度法可以用于检测泽泻提取物中总三萜含量,高效液相色谱法可用于检测泽泻提取物中12个泽泻三萜类成分含量.
关键词： 泽泻 泽泻提取物 原萜烷型四环三萜类成分 泽泻醇 乙酰泽泻醇 去氧泽泻醇 紫外-可见分光光度法 高效液相色谱法
