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乳腺癌中雌激素受体与靶基因的结合预测内分泌治疗的敏感性观察
目的:为提高乳腺癌患者内分泌治疗的敏感性,建立雌激素受体与靶基因结合活性的测定。方法:使用凝胶阻滞方法,用γ-32P-ATP标记雌激素效应元件(ERE):作为探针检测89例乳腺癌组织中ER与靶基因DNA的结合活性。结果:89例乳腺癌患者中50例ER(+)者中35例ERE(+),占70%;ER(+)、PR(+)的22例中18例ERE(+);而ER(-)患者中有7例为ERE(+)占ER(-)患者的18%。结论:依照ERE的测定结果,结合ER,PR状态对临床乳腺癌的预后和抗激素治疗作出预测,并分为二大类:Ⅰ类为ER(+)、ERE(+)、PR(+),这组患者预后较好,可优先考虑抗激素治疗Ⅱ类为ER(-)、ERE(-)、PR(-),抗激素治疗无效;ER(+)、PR(-)组依据ERE(+)归于Ⅰ类,ERE(-)归于Ⅱ类;对于ER(-)、PR(+)组ERE(+)为Ⅰ类,ERE(-)为Ⅱ类。经过这样的分类可增加科学性,减少临床用药的盲目性。
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非小细胞肺癌中PTB对肿瘤抑制基因ceacam1选择性拼接的调控研究
目的:研究在非小细胞肺癌及癌旁组织中ceacam1通过选择性拼接而产生的两种转录产物的调控机制.方法:将用PCR方法获得ceacam1基因中从内含子5至外显子8长1 606 bp DNA片段插入到真核表达载体pCMV中,构建成ceacam1迷你基因模型并与ptb基因共转染,用PCR法鉴定转染后的产物变化;根据外显子7序列设计的探针GAE(16-nt)及ACE(8-nt)进行凝胶阻滞分析实验.分离与探针结合的蛋白并进行质谱分析.结果:ptb 3种cDNA与ceacam1迷你基因共转染后,CEACAMlL表达水平下降,其中ptb 4对迷你基因的表达产物影响大.仅转染迷你基因的细胞中ceacam1L在两条带中所占比例为76.7%,而与ptb 3种重组质粒共转染后,比例分别下降至58.3%、64.8%和54.0%.凝胶阻滞实验表明,探针GAE能与核蛋白结合,而ACE基本不能与核蛋白结合,与GAE结合的蛋白经质谱分析为PTB.结论:PTB过表达与ceacam1低表达有明显的相关性,拼接因子PTB参与ceacam1的选择性拼接.
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凝胶阻滞检测核蛋白-DNA结合方法的探讨
目的:探讨改良的凝胶阻滞法用于核蛋白-DNA结合的检测.方法:培养人真皮成纤维细胞,用维甲酸刺激不同时段,抽提其核蛋白,与32P-标记维甲酸反应元件(RARE)及维甲类X受体抗体α、β(RXR α、β)结合,进行凝胶阻滞分析.结果:细胞于不同状态可出现迁移率不同的条带,加入RXR β抗体可产生新的上移条带.结论:改良后的凝胶阻滞法较简单灵敏,可用于核蛋白-DNA结合的检测.
