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联合X-连锁基因多个多态性位点采用逆转录检测法进行造血细胞克隆性分析
目的 探索中国正常女性X-连锁葡萄糖6-磷酸脱氢酶(G6PD)、P55、BTK、FHL-1基因外显子多态性位点的杂合子基因型频率,并探讨应用以上位点采用基于X染色体失活克隆性检测法-逆转录检测法进行造血细胞克隆性分析的价值.方法 采集446名中国正常女性外周血标本,提取基因组DNA,应用等位基因特异性PCR或PCR-限制性片段长度多态性方法 分析X-连锁G6PD、P55、BTK、FHL-1基因外显子多态性位点的杂合基因型频率.以上述杂合位点作为克隆性分析的标记,采用逆转录检测法分析有JAK2V617F突变或克隆性染色体异常的原发性血小板增多症(ET)女性患者造血细胞的克隆性.结果 446名中国正常女性G6PD基因杂合基因型频率为12.8%(57例),P55基因杂合基因型频率为29.4%(131例),BTK基因杂合基因型频率为52.0%(232例),FHL-1基因杂合基因型频率为46.4%(207例).4个多态性位点中具有至少1个杂合位点的正常女性占81.4%(363例).对G6PD、P55、BTK或FHL-1为杂合子且伴JAK2V617F突变的10例ET患者,应用逆转录检测法进行造血细胞克隆性分析,所有患者均为单克隆/寡克隆.结论 基于X染色体失活的克隆性检测法-逆转录检测法可用于约80%中国女性患者的克隆性分析.
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胸腺基质细胞促进CD4CD8双阳性胸腺细胞排除或成熟
胸腺基质细胞(Thymic stromal cells,TSC)是胸腺微环境重要的组成部分,对胸腺细胞的分化发育具有重要作用.TSC可促进胸腺细胞的成熟分化,减少胸腺细胞凋亡[1],也可促进CD4+CD8+双阳性(DP)胸腺细胞凋亡及克隆排除[2].本文用光镜和电镜观察初代TSC与胸腺细胞的相互作用,用流式细胞术检测TSC对胸腺细胞凋亡及CD4、CD8亚群的影响,探讨TSC对胸腺细胞发育的调节作用及其可能的机制.
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抗MHC-Ⅰ类分子单抗促进异基因小鼠皮肤移植耐受
目的通过静脉注射异基因脾细胞和抗H-2b单抗加腹腔注射环磷酰胺诱导成年B6小鼠对异基因皮肤移植物产生免疫耐受.方法经C57BL/6(H-2b,B6)小鼠尾静脉注射BALB/c小鼠(H-2d)脾细胞,2 d后腹腔注射环磷酰胺(CP),随后2次尾静脉注射抗小鼠的H-2b单克隆抗体,然后进行皮肤移植,并于耐受30d对受体B6小鼠作混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)、迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)等耐受状态检测.结果 BALB/c小鼠的皮肤移植物在耐受B6小鼠中存活期特异延长.MLR和DTH检验证明:B6小鼠对BALB/c小鼠的脾细胞产生特异性耐受,对无关第3者KM小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫反应.结论抗MHC-Ⅰ类分子单克隆抗体可明显促进"细胞+CP"诱导的异基因皮肤移植耐受;克隆排除是诱导耐受的主要因素.
