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定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子BA-ELISA方法的建立与评价
目的:建立一种定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)方法并评价其可靠性.方法:优选设计CFTR三个表位的大肠杆菌表达抗原,免疫新西兰白兔获得CFTR多克隆抗体,用纯化后的抗体包被酶标板,并用生物素对其标记,从人精子提取CFTR作为抗原,用辣根过氧化物酶偶联的亲和素检测,优化两种抗体浓度及实验参数,建立可定量检测CFTR蛋白的双抗体夹心BA-ELISA方法;用临床精子标本评估所建立方法的重复性、特异性等.结果:CFTR包被抗体和生物素化CFTR抗体适浓度分别为4μg/ml和10μg/ml,佳封闭液为1％ BSA-PBST,抗原与包被抗体佳反应时间60 min,底物显色佳时间15 min.批内、批间变异系数分别为2.16％ ～ 9.23％和2.29％ ～ 11.71％,包被的CFTR抗体与精子胞浆蛋白无交叉反应,低检出下限为0.15 ng/ml,标准反应曲线具有良好的线性关系R2=0.962.结论:成功创建了定量检测CFTR蛋白的ELISA方法,具有特异性强、灵敏度高等特点.
关键词： CFTR蛋白 CFTR多克隆抗体 生物素-亲和素ELISA -
强精煎对少、弱精子症大鼠CFTR蛋白表达的影响
目的:观察强精煎对少、弱精子症大鼠睾丸及附睾精子CFTR蛋白表达的影响.方法:75只雄性成年SD大鼠随机分为模型组、正常组、黄精赞育胶囊组、强精煎低剂量组、强精煎高剂量组,除正常组外,采用环磷酰胺诱导少、弱精子症大鼠模型.正常组和模型组大鼠给予生理盐水;黄精赞育胶囊组给予黄精赞育胶囊;强精煎低、高剂量组给予强精煎免煎颗粒低、高剂量.采用Western blot检测睾丸CFTR蛋白表达,细胞间接免疫荧光检测附睾精子CFTR表达率.结果:模型组、正常组、黄精赞育胶囊组、强精煎低剂量组、强精煎高剂量组睾丸组织CFTR蛋白相对表达量分别为(0.31±0.03)、(1.63±0.05)、(1.28±0.03)、(0.52±0.03)、(1.30±0.09);附睾精子CFTR蛋白表达率(％)分别为:(0.199±0.079)、(0.770±0.075)、(0.609±0.068)、(0.293±0.086)、(0.653±0.089).与模型组相比,强精煎低、高剂量组和黄精赞育胶囊组CFTR蛋白在睾丸、附睾精子的表达均显著上调(P＜0.05),强精煎高剂量组和黄精赞育胶囊组表达水平无显著差异(P＞0.05).结论:强精煎不同剂量均可不同程度增加了CFTR蛋白表达,调控精子发生,调节精子获能,提高受精能力,以上可能为其治疗少、弱精子症的机制之一.
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CFTR蛋白在鼻息肉和正常下鼻甲黏膜中的表达
目的:探讨囊性纤维跨膜转运调节因子(CFTR)在鼻息肉发病机制中的作用.方法:采用免疫组织化学SP法检测28例慢性鼻窦炎患者鼻息肉组织(鼻息肉组)和7例正常下鼻甲黏膜(下鼻甲组)中CFTR蛋白的表达情况.结果:①CFTR在上述2组组织均有表达,主要表达于上皮细胞和分泌细胞,并且优势表达于鼻息肉.CFTR在正常下鼻甲黏膜呈较为单一的顶上膜表达,而在鼻息肉中呈顶上膜表达和细胞质表达并存;②鼻息肉组CFTR的黏膜上皮阳性细胞顶上膜表达的强度值(1.921±0.310)显著高于下鼻甲组(0.971±0.214)(P<0.05).鼻息肉组CFTR的上皮阳性细胞质表达的强度值(2.036±0.439)亦显著高于下鼻甲组(0.550±0.366)(P<0.05).结论:氯离子通道CFTR蛋白的过度表达和异常表达可能在鼻息肉的发病机制中起重要的作用.
