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输注分子嵌合小鼠前体T细胞抑制异源小鼠T细胞增殖反应的研究
目的 研究分子嵌合前体T细胞(pre-T细胞)对异基因T淋巴细胞增殖能力的影响,旨在为研究同种异体器官移植诱导免疫耐受提供新策略.方法 RT-PCR获取C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ等位基因H-2Kb和H-2Db基因,并与pIRES质粒连接,构建重组质粒并转染体外培养BALB/c小鼠pre-T细胞构建分子嵌合细胞,并设立未转染及转染空质粒对照组.各组细胞回输BALB/c小鼠,7d后提取各组小鼠脾脏T细胞,将其与C57BL/6小鼠T淋巴细胞混合培养,观察刺激指数(SI).结果 构建质粒测序表明,插入序列的结果包含GenBank检索的C57BL/6小鼠H-2Kb和H-2Db序列,流式细胞仪检测质粒pIRES-H-2Kb和pIRES-H-2Db转染后,pre-T细胞表面H-2Kb及H-2Db蛋白的表达增高,与未转染组及转染空质粒组相比,其差异均具有统计学意义(P＜0.05).单向混合淋巴细胞培养结果显示:2质粒共注射pre-T细胞组的SI值(0.764±0.074)较空质粒组(0.983±0.081)和未转染组(0.994±0.142)明显下降,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 分子嵌合细胞可降低受体T细胞对异基因T淋巴细胞刺激的增殖反应,有望应用于体内诱导免疫耐受.
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乳香提取物促进免疫低下小鼠模型胸腺前体T细胞分化机制的研究
采用环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型,探索乳香提取物提高免疫低下小鼠胸腺前体T细胞数量、增殖及上调Th1和Th2细胞因子产生的作用机制.采用灌胃给小鼠口服乳香提取物.灌胃后取小鼠外周血和胸腺细胞悬液,用特异性抗体染色并经FACS观测小鼠上述细胞数量变化.采用胸腺细胞培养法检测胸腺基质细胞对于前体T细胞分化成熟的支持作用;采用实时定量PCR方法分析乳香提取物促进Th1细胞分化的可能机制.结果表明,乳香提取物具有明显上调小鼠胸腺内未成熟T细胞数量；促进胸腺基质细胞生长及对T细胞分化成熟的支持作用；T细胞发育相关基因表达格局表明灌胃组小鼠胸腺中细胞因子IL-2、lL-6和IL-1基因表达量较对照组高,转录因子T-bet和gata3表达量也增高.进一步分析表明Notch1和其配体DLL1的基因表达量增加.结果提示乳香提取物上调小鼠Th1/Th2细胞亚群可能是通过介导North1/DLL1信号途径而促进胸腺内T细胞分化与成熟.
关键词： 乳香提取物 Th1/Th2细胞 胸腺 前体T细胞 North1/DLL1通路 -
输注分子嵌合前体T细胞减低小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠T细胞的刺激反应
目的构建分子嵌合主要组织相容性复合体（MHC）-Ⅰ基因小鼠前体T细胞，并探讨其诱导脾脏T细胞减低对异基因小鼠T细胞反应的可行性。方法体外分离培养BALB/c小鼠前体T细胞，构建携带C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因（H-2Db和H-2Kb）真核表达载体pIRES-H-2Db和pIRES-H-2Kb，分别转染BALB/c小鼠前体T细胞，构建分子嵌合前体T细胞。将分子嵌合前体T细胞回输BALB/c小鼠后7天，获取脾脏T淋巴细胞，与C57BL/6小鼠T细胞进行混合淋巴细胞培养，观测刺激指数（SI）。结果成功体外培养BALB/c小鼠前体T细胞，体外转染C57BL/6小鼠H-2Db和H-2Kb基因至BALB/c小鼠前体T细胞，H-2Db和H-2Kb蛋白表达率分别可达（14.90±0.56）%和（14.20±0.63）%。单向混合淋巴细胞培养显示，输注分子嵌合前体T细胞的BALB/c小鼠脾脏T细胞对C57BL/6小鼠T细胞SI，在pIRES-H-2Db和pIRES-H-2Kb转染的小鼠前体T细胞共注射组为（0.764±0.074），比空质粒组（0.983±0.081）和未转染组（0.994±0.142）明显下降（均P＜0.05）。共注射组SI值分别与转染质粒pIRES-H-2Db组SI值（0.859±0.085）和转染质粒pIRES-H-2Kb组SI值（0.860±0.097）相比，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论输注分子嵌合MHC-Ⅰ基因前体T细胞的小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠T细胞刺激反应明显减低。
关键词： 前体T细胞 主要组织相容性复合体-Ⅰ基因 分子嵌合
