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乳液PCR文献资料
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在光纤芯片上进行高速个体化全基因组测序
新近发展的在光纤芯片上做高通量测序的技术,可以将人类全基因组序列的测定时间由目前所用的10年时间缩短到100d.光纤芯片上的基因组测序结合了磁珠、乳液PCR和焦磷酸测序法等技术,利用光纤优良的表面性质和有效的加工工艺,将光纤制作成一种基因芯片.在芯片上用磁珠来耦联DNA、RNA等微量反应物.乳液PCR可以获得大量的不同的基因组DNA片段.乳液PCR和光纤芯片都是由于有了磁珠作为微量反应物的载体,从而可以将反应一再小型化.而这些技术的结合,工作效率是目前常规的测序方法的100多倍.成功实现了基因组测序反应小型化、高通量化的思想,大大降低了成本,减少了完成全基因组测序的时间.
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乳液单引物PCR构建随机ssDNA文库方法的建立及优化
目的 建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ssDNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率.方法 构建长90 bp(含52 bp随机序列)寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成dsDNA文库,再以dsDNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常规单引物PCR扩增制备ssDNA文库,并对二者进行比较.通过改变模板、聚合酶、dNTP和引物浓度优化乳液单引物PCR反应条件.结果 乳液PCR能高效扩增出dsDNA文库且无副产物;常规单引物PCR构建ssDNA文库时,15个循环时即有大量副产物产生,且与产物条带混合一起无法分离;而乳液单引物PCR从15 ～35个循环均无副产物生成,且产物量多于常规单引物PCR.在优化乳液单引物PCR时,模板浓度对产物量影响大,引物浓度对副产物的量影响大.结论 乳液单引物PCR能显著提高产物量并控制副产物的量,可提高指数富集配体进化(SELEX)技术筛选效率.
关键词： 乳液PCR 乳液单引物PCR 适配子 指数富集配体进化技术 随机ssDNA文库
