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云南重楼正丁醇提取物对白念珠菌生物膜形成的抑制作用
目的 观察云南重楼正丁醇提取物(BEPP)对体外白念珠菌生物膜形成的影响.方法 微量稀释法测定BEPP低抑菌浓度(MIC),XTT法测定生物膜抑制80％浓度(SMIC80),平板法绘制时间-杀菌曲线,扫描电镜(SEM)观察生物膜形态结构,激光共聚焦显微镜(CLSM)观测生物膜厚度,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测生物膜形成相关基因HWP1、MP65、SUN41表达量的变化.结果 BEPP对白念珠菌的MIC为32～128 μg/mL,对白念珠菌生物膜的SMIC80为128～512 μg/mL,时间-杀菌曲线显示BEPP具有良好的杀菌作用,SEM观察到BEPP有效抑制白念珠菌生物膜形成,CLSM显示BEPP可以降低生物膜厚度,qRT-PCR检测显示在BEPP作用下,HWP1、MP65、SUN41基因表达量均显著下调.结论 BEPP可以有效抑制体外白念珠菌生物膜的形成.
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白鲜皮提取物体外抗白念珠菌生物膜作用及相关基因的研究
目的:研究白鲜皮提取物在体外对白念珠菌生物膜及相关基因的影响.方法:M27-A2测定白鲜皮提取物对白念珠菌的小抑菌浓度(MIC);XTT法评价白鲜皮提取物对白念珠菌生物膜形成及细胞黏附的影响;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测白鲜皮提取物作用后,ALS3、HWP1基因表达情况.结果:白鲜皮提取物对白念珠菌的MIC为128μg/mL;对生物膜的SMIC50和SMIC80分别为256 μg/mL和512 μg/mL;与空白对照组相比,不同浓度白鲜皮提取物(16～512 μg,/mL)对培养1、2、3、4h的白念珠菌细胞黏附均有明显抑制作用(P＜ 0.05);qRT-PCR结果显示药物作用后ALS3、HWP1基因表达降低(P＜0.05).结论:白鲜皮提取物对体外白念珠菌生物膜有较明显的抑制作用,其机制可能通过抑制ALS3、HWP1等相关基因的表达,从而抑制Ras/cAMP通路的功能.
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重组融合蛋白早期快速诊断侵袭性念珠菌病的实验研究
目的 建立一种IC早期快速准确的诊断方法.方法 178例临床需要送检侵袭性念珠菌病常规检测和真菌培养的患者血清为研究对象,其中103例确诊为侵袭性念珠菌病者作为病例组,75例为在同样免疫妥协易感人群但无念珠菌感染微生物学证据的患者血清作为对照组.应用基因重组的方法,将念珠菌菌丝壁蛋白(HWP1),与位于细胞壁的糖酵解酶(烯醇化酶蛋白ENO1)进行基因克隆,随后将由HWP1与ENO1组成的重组蛋白在大肠杆菌中表达,并建立酶联免疫方法(ELISA),检测患者血清中的IgG特异性抗体.通过统计学的分析,计算出该方法的灵敏度,特异性,阳性预测值,阴性预测值.筛选出灵敏度高,特异性强,阳性预测值和阴性预测值均高的融合蛋白抗原建立的ELISA方法.结果 病例组中抗-ENO1、抗-HWP1以及二者联合检测的阳性检出率均显著高于对照组(P＜0.01),差异有统计学意义.抗-HWP1与抗-ENO1两方法相比,抗-HWP1的敏感性(x2=37.622,P＜0.01)、阳预测值(x2=74.427,P＜0.01)及阴性预测值(x2=2.057,P=0.152)均显著高于抗-ENO1;联合检测与抗-ENO1比较,敏感性(x2=44.524,P＜0.01)、特异性(x2=9.765,P=0.002)及阳预测值(x2=72.000,P＜0.01)均显著高于抗-ENO1;联合检测与抗-HWP1相比,特异性(x2=4.700,P=0.030)、阴性预测值(x2=3.191,P=0.074)显著高于抗-HWP1.结论 ENO1和HWP1蛋白重组后联合诊断的效果更佳,可以作为IC早期快速准确的诊断方法.
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外阴阴道念珠菌病白念珠菌交配型基因分析及其致病性研究
目的：：研究临床致病白念珠菌交配型基因MTL纯合子与杂合子的流行病学特点,分析其与外阴阴道念珠菌病患者的临床特征、白念珠菌致病力及毒力的关系。方法：通过普通PCR对临床外阴阴道念珠菌病患者阴道分泌物分离的致病白念珠菌MTL基因进行检测,应用实时荧光定量PCR反应分析MTL纯合子与杂合子中毒力相关基因ASL3、SAP1和HWP1基因的表达,并采用Rosco药片扩散法对白念珠菌进行体外药物敏感试验。结果：1338株白念珠菌中,1330株为MTLa/α杂合子,8株为MTL纯合子(7株MTLa/a纯合子,1株MTLα/α纯合子)。8株MTL纯合子所致外阴阴道念珠菌病患者中6例患者达到真菌学治愈。与杂合子相比,白念珠菌MTL纯合子对唑类药物耐药性较高(0~75％ vs 0~2.7％,P<0.05)。毒力相关基因ASL3在两者中的表达无明显统计学差异,SAP1在MTL杂合子中表达稍高(1.02±0.68 vs 0.83±0.31,P>0.05),而HWP1在杂合子中表达明显增高(1.71±1.42 vs 1.20±0.62,P<0.05)。结论：外阴阴道念珠菌病白念珠菌MTL纯合子在外阴阴道念珠菌病患者中流行率较低；与杂合子相比, MTL纯合子耐药性增加；而毒力相关基因HWP1、SAP1和ASL3在纯合子中表达降低,这与其临床特征相符。
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舒乐洗剂治疗VVC小鼠的作用机制研究
目的:研究舒乐洗剂治疗VVC的作用机制.方法:建立ICR小鼠白念珠菌阴道炎模型,分组给药后分离提取小鼠阴道灌洗液总RNA,反转录成cDNA,采用RT-PCR技术,检测给药前后各组小鼠阴道分泌物中白念珠菌的毒力基因HWP1及SAP表达情况.结果:模型对照组小鼠阴道内白念珠菌毒力基因HWP1和侵袭酶SAP2、SAP4、SAP5呈高表达状态,与模型组比较,舒乐洗剂组小鼠HWP1基因和侵袭酶SAP2、SAP4、SAP5的表达显著降低.结论:舒乐洗剂能够抑制毒力基因HWP1和SAP的表达,可能是其治疗WC的作用机制.
