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慢性铝暴露对大鼠不同组织中ERK1/2蛋白表达的影响
目的 通过观察慢性铝暴露后大鼠学习记忆行为、肝脏、肾脏、和大脑皮层ERK 1/2含量变化,探讨铝暴露对机体毒性的产生机制,并为治疗铝中毒提供实验依据.方法 大鼠自由饮用不同剂量AlC13水溶液(0.2％、0.4％和0.6％)3个月,实行慢性铝暴露,蛋白免疫印迹( Westem-Blot)方法测定各组细胞外信号调节激酶(ERK 1/2)活力及含量变化.结果 与对照组相比较,各个铝暴露组ERK 1/2表达比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 铝暴露可对大鼠身体内重要脏器组织中关键蛋白ERK 1/2产生影响,这可能是铝霉性产生的机制之一.
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牛膝多肽可能通过ERK1/2途径诱导PC12细胞向神经元分化
目的:研究牛膝多肽(ABPP)诱导PC12细胞向神经元分化的作用,初步探讨ABPP作用于PC12细胞的信号转导途径.方法:以体外培养的PC12细胞为研究模型,观察在低血清的情况下不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00 μg/ml)诱导PC12细胞发生的形态学改变.采用免疫荧光细胞化学法,观察神经丝蛋白(NF-H)在ABPP诱导分化的PC12细胞中的表达;采用Western blot法观察ABPP(1.0 μg/ml)加药后不同时间段(0、6、12h和1、2、3、7d)和不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00 μg/ml)加药2d后对PC12细胞ERK 1/2活性的影响,同时应用ERK1/2特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养PC12细胞,分析ABPP对PC12细胞的作用与ERK1/2通路的关系.结果:ABPP处理3d后,部分PC12细胞开始出现神经元样的形态.随着加药时间延长具有神经元样的细胞逐渐增多,到7d时,可以见到神经生长因子(NGF)和ABPP处理组PC12细胞的突起都显著增多,能形成网络;14 d时,这种现象愈发显著.加药后7d和14d,ABPP各浓度组的细胞分化率以及细胞突起长度均明显提高,且存在明显的剂量反应关系.加药第7天和第14天,ABPP高剂量组与NGF组的PC12细胞均出现NF-H标记阳性的分化细胞.ABPP对ERK1/2的激活作用存在明显的量效关系,以1.0 μg/ml作用2d为大.当用PD98059抑制ERK1/2的活化时,ABPP对ERK1/2的激活作用被部分阻断.结论:ABPP具有诱导PC12细胞神经元性分化的作用,此作用可能是通过ERK1/2信号转导途径实现的.
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异氟醚可能通过ERK磷酸化增强肾动脉平滑肌收缩
目的实验观察异氟醚对去内皮肾动脉血管平滑肌收缩增强的作用,并观察肾动脉血管平滑肌细胞在异氟醚的作用下细胞内MAPK通路的激活状态,以探讨异氟醚引发肾动脉血管平滑肌收缩增强的可能信号通路.方法①去内皮肾动脉条,3%皂苷处理使膜通透,咖啡因诱除内质网内贮钙,利用10-6钙离子浓度EGTA 缓冲液平衡后,应用接近大的钙离子浓度的EGTA 缓冲液使肾动脉条压缩达平衡,加入不同浓度异氟醚EGTA缓冲溶液,观察动脉条张力变化.②1%、3%、5%异氟醚分别作用于培养的肾动脉血管平滑肌细胞,提取细胞内蛋白,Westen-blot 检测ERK磷酸化的变化.结果异氟醚能使压缩达平衡的肾动脉环张力进一步增强,且与异氟醚浓度呈剂量依赖性.随异氟醚浓度的增加,培养的肾动脉血管平滑肌细胞内ERK 1/2 (p44/42)磷酸化逐步增强,并随时间增强,在15 min后,逐渐下降.结论异氟醚引起的肾动脉血管条收缩增强可能与异氟醚引起MAPK系统活化有关
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ERK1/2-PKM2/P53信号通路在喉癌Hep-2细胞株增殖中的作用
目的:探究ERK 1/2通过PKM2/P53信号通路调节喉癌Hep-2细胞株增殖的潜在机制.方法:采用细胞计数的方法统计经ERK 1/2抑制剂U0126、P53抑制剂PFTα处理后0,24,48 h时Hep-2细胞的细胞密度,实验随机分为空白对照组(Control)、对照组(Vehicle)、处理组(U0126或PFTα).采用转染PKM2-siRNA或PKM2-cDNA的方法在Hep-2细胞株上抑制或过表达PKM2.采用免疫印迹(Western Blot)的方法检测不同处理情况下ERK 1/2、p-ERK 1/2、P53、PKM2的蛋白水平.结果:抑制ERK 1/2的磷酸化可抑制Hep-2细胞生长,抑制P53可阻断抑制ERK 1/2导致的Hep-2细胞生长变缓.同时,抑制ERK 1/2可下调PKM2水平,抑制或过表达PKM2可分别上调或下调P53.过表达PKM2可阻断抑制ERK 1/2引起的Hep-2细胞生长变缓.结论:抑制ERK 1/2的磷酸化可通过下调PKM2水平促进P53表达进而抑制Hep-2细胞生长.
