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硝酸菌norB基因的克隆及序列分析
目的扩增、克隆硝酸菌的norB基因.方法通过PCR扩增硝酸菌的norB基因,然后克隆至T载体中,并转化进E.coli JM109中.通过兰白斑挑选阳性转化子.对质粒测序,并与Genbank上的序列进行同源性分析.结果同源性搜索发现所有扩增到的基因无论在核酸序列水平还是在蛋白序列水平都与Genbank上的汉堡硝化杆菌norB基因同源,且同源性高达96%～98%.结论扩增获得的基因经过基因序列分析证实为硝酸菌norB基因.
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一株硝化杆菌的筛选及初步鉴定
目的筛选、分离能够用于治理氮污染的硝化菌.方法通过富集培养从土壤中筛选自养型硝化菌,在进行形态学和生化的检验之后设计引物,扩增硝化菌的特征性基因norB之后对PCR产物进行测序,并与Genbank上的序列比较同源性.结果从土壤中筛选到了1株能够氧化亚硝酸盐的细菌,该菌形态小、浅黄色菌落,是杆菌.PCR能扩增出预期大小片段.对其PCR产物直接测序,与Genbank上的序列比较,发现该基因与硝化菌Nhamburgensis的norB基因同源性高达99%.结论可以初步断定该研究所筛选到的细菌属于硝化杆菌.
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应用表达谱基因芯片筛选子宫内膜异位症相关差异基因
目的:研究子宫内膜异位症患者(EMs)与非子宫内膜异位症(非EMs)患者在位子宫内膜基因表达的差异,从分子水平探讨子宫内膜异位症的发病机制.方法:选用含有14112位点的人类表达谱cDNA基因芯片,筛选EMs患者与非EMs患者不同月经周期在位子宫内膜的差异表达基因.结果:筛选出增生期差异基因193个,其中上调58个,下调135个;分泌期差异基因93个,其中上调6个,下调87个;增生期和分泌期共同差异基因20个,其中上调1个,下调19个.结论:用表达谱基因芯片可有效地研究EMs患者与非EMs患者不同月经周期在位子宫内膜基因表达的差异,通过进一步分析有望筛选出与EMs相关的新基因靶点.
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表达谱基因芯片筛选子宫内膜异位症相关基因及IL-12受体在子宫内膜异位症中的作用
目的:探讨子宫内膜异位症(EM)患者的发病机制和白细胞介素-12(IL-12)及其受体(IL-12R)的水平与疾病进展的关系.方法:应用578点的人类免疫相关表达谱cDNA基因芯片筛选EM相关基因.酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定21例EM患者及21例对照者血清中IL-12水平.结果:(1)用Array 3000扫描仪扫描芯片,观察杂交结果,用Ima Gene 3.0软件分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值.在对6张芯片的结果分析中,获得EM的相关差异基因9个,共同表现为上调的基因2个,下调的基因7个.其中下调基因中差异显著的是IL-12R;(2)ELISA检测结果显示EM组与对照组患者血清中IL-12水平无明显差异;EM患者血清IL-12水平与疾病期别无明显相关;两组患者血清IL-12水平与月经周期亦无明显相关.结论:基因芯片技术是一种有效的、高敏感、高通量的技术.EM患者的异位内膜组织的IL-12R mRNA水平表现为下调,表明它可能在此疾病的发生与发展中起重要作用.
