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CCDC67基因mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义
目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)及癌旁组织中CCDC67基因转录水平的差异及其与PTC临床病理特征的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测了48例PTC及其相对应的癌旁组织中CCDC67的转录情况;同时对甲状腺癌细胞系(TPC-1、SW579)CCDC67基因的转录进行了检测.结果 在TPC-1、SW579细胞系中,CCDC67mRNA表达均缺失.癌旁组织中均出现CCDC67mRNA的表达(100.0％,48/48),而在PTC中CCDC67基因mRNA表达明显下降为39.6％(19/48) (P＜0.05).在PTC中,Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期的CCDC67mRNA表达率分别为60％ (12/20)、25％ (7/28);在有淋巴结转移的PTC中CCDC67mRNA的表达率为24.1％ (7/29),在无淋巴结转移的PTC中CCDC67mRNA的表达率为63.2％ (12/19);在病理分级Ⅰ级和Ⅱ级中,CCDC67mRNA的表达率分别为61.1％(11/18)和26.7％(8/30).以上各组中差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 CCDC67mRNA表达的异常可能是引起CCDC67失活的原因,并可能与PTC的发生、发展及转移有关.
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CCDC67基因慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的 构建CCDC67基因慢病毒表达载体,为后续转染目的细胞奠定基础,并实现在细胞中高效、稳定表达.方法 从含有CCDC67基因的cDNA文库中,利用PCR方法钓取CCDC67基因编码区片段.将目的基因与酶切载体pGV-208进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞.对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,对比正确的克隆即为构建成功的目的质粒.将构建成功的目的质粒和两种辅助包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒,在荧光显微镜下观察慢病毒转染293T细胞后荧光表达情况.采用Western blot检测CCDC67及绿色荧光蛋白融合蛋白表达情况.结果 PCR产物经电泳分析表明成功获取CCDC67基因cDNA克隆,测序结果显示慢病毒转染质粒连接构建正确.荧光表达检测显示293T细胞中产生慢病毒颗粒,Western blot显示CCDC67在细胞内稳定表达.结论 成功构建CCDC67基因慢病毒表达载体,为后续转染目的细胞后从分子水平探讨CCDC67基因功能奠定了实验基础.
