首页 > 文献资料
-
特发性心房颤动患者KCNA5基因突变的识别及功能分析
目的 研究KCNA5基因突变导致特发性心房颤动(AF)的分子机制.方法 收集2008年6月-2009年12月在上海交通大学附属胸科医院和上海同济医院就诊的130例特发性AF患者的临床资料和血标本,以200名健康者为对照.PCR扩增候选基因KCNA5的外显子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法测序以识别基因突变.使用Alignment程序对比分析突变氨基酸的保守性.克隆野生型KCNA5基因,通过定位诱变获得突变型KCNA5,构建KCNA5基因表达载体和亚细胞定位载体,脂质体转染COS-7细胞,分别利用膜片钳和激光共聚焦显微镜研究KCNA5基因突变对其编码的离子通道的电生理特性和亚细胞定位的影响.结果 在其中1例特发性AF患者的KCNA5基因识别出1个杂合错义突变,其编码核苷酸序列第1580位的胞嘧啶(cytosine,C)变成胸腺嘧啶(thymine,T),称为c.1580C＞T突变,相应的第527位的密码子由ACG变为ATG,导致第527位的苏氨酸(threonine,T)变为蛋氨酸(methionine,M),亦即T527M突变.功能分析显示KCNA5基因T527M突变不影响其编码的离子通道蛋白的定向运输,但使离子通道电流减小.结论 在特发性AF患者识别出KCNA5基因T527M突变,该突变通过使相应通道的离子流减小而导致特发性AF.
-
FHL2蛋白与心脏Kv1.5钾通道相互作用的研究
目的 目前认为KCNA5通道蛋白是治疗房颤的一个理想靶点,文中旨在验证FHL2蛋白与KCNA5基因编码的心脏Kv1.5钾通道是否存在相互作用.方法 ①质粒构建:应用PCR法构建质粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2;②基因转染:应用Lipofectamine 2000将pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5质粒和pcDNA3.0-FHL2质粒共转染HEK293细胞;③免疫共沉淀:应用抗FHL2抗体和Protein A/G Plus-Agarose沉淀目的 蛋白,应用抗Myc抗体进行Western blot分析;④免疫荧光细胞化学分析:应用抗FHL2一抗和标记有FITC的二抗检测FHL2蛋白,应用抗Myc一抗和标记有Cy3的二抗检测KCNA5-Myc融合蛋白.结果 ①酶切和测序结果表明质粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2构建正确;②抗FHL2抗体能够将KCNA5从总蛋白中沉淀下来;③KCNA5蛋白和FHL2蛋白共定位于细胞膜上.结论 初步证实FHL2蛋白与KCNA5蛋白存在相互作用.
-
KCNA5基因单核苷酸多态性与特发性心房颤动的关系
目的:探讨KCNA5基因单核苷酸多态性与特发性心房颤动(IAf)的相关性.方法:应用病例对照研究方法,收集IAf患者188例(IAf组),年龄性别相匹配的健康人200例(对照组),采用基因测序技术检测rs3741930与rs1056468单核苷酸多态位点在两组中的分布情况.结果:①IAf组rs3741930多态位点CC基因型频率显著高于对照组(P=0.028)；②rs1056468多态位点在两组间基因型频率和等位基因频率的分布差异无统计学意义；③IAf组rs3741930和rs1056468的不同基因型患者BMI水平存在统计学差异(均P＜0.05).结论:KCNA5基因调控区单核苷酸多态位点rs3741930可能与中国人IAf的发生和发展有关,多态位点rs3741930和rs1056468可能对IAf患者的BMI产生影响.
